论文部分内容阅读
目的：研究精脒合成酶（spermidine synthase, SPDS）高表达对人宫颈癌Caski细胞的多胺含量，细胞生长和细胞迁移的影响。方法：采用巢氏PCR法从人宫颈癌Caski细胞cDNA中克隆出人基因SPDS并构建重组质粒pcDNA3.1(-)/SPDS。将pcDNA3.1(-)空载和pcDNA3.1(-)/SPDS质粒用脂质体法分别转染Caski细胞，然后用Western blot和RT-PCR分别检测成功转染细胞内SPDS的mRNA和蛋白表达水平，由此筛选获得对照细胞株Caski/3.1和精脒合成酶高表达细胞株Caski/SPDS。QT-RT-PCR用于检测细胞中ODC（鸟氨酸脱羧酶）、OAZI（鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子）、AMDC（S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶）、SMS（精胺合成酶）、SSAT（精脒/精胺乙酰转移酶）和APAO（乙酰多胺氧化酶）的mRNA水平。MTT法和流式细胞术（FCM）用于检测细胞增殖和细胞周期。反相高效液相色谱用于检测细胞内多胺水平。Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。Western blot用于检测细胞内AnnexinA2的蛋白表达水平。结果：1)成功获得高表达SPDS的Caski细胞克隆株Caski/SPDS。Caski/SPDS细胞中的SPDS在mRNA和蛋白水平的表达明显高于Caski/3.1细胞。2) SPDS高表达导致细胞内多胺合成酶ODC、AMDC和SMS，降解代谢酶SMO、SSAT和APAO mRNA水平均显著性升高，而对OAZI mRNA水平没有影响。3)高表达SPDS能抑制Caski细胞增殖并影响Caski细胞的细胞周期，G0/G1期细胞增加而S期细胞减少。4)反相高效液相色谱结果显示，Caski/SPDS细胞中腐胺的含量明显减少，精脒和精胺的含量略微上升，多胺总含量显著性下降。5) SPDS高表达可明显抑制Caski细胞的迁移，并抑制细胞迁移相关蛋白AnnexinA2的表达。6) SPDS高表达降低Caski细胞对抗肿瘤多胺类似物BENS的敏感性。结论： SPDS高表达能全面加快细胞内的多胺代谢速度，具有降低细胞内多胺总含量，抑制Caski细胞生长和迁移的作用，提示SPDS具有作为抗肿瘤治疗分子靶点的潜在价值。