论文部分内容阅读
目的:1.急性心肌梗死（Acute myocardium infarction,AMI）患者血清中内源性巯基化合物谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）及半胱氨酸（Cysteine,Cys）被手性拆分后得到对映异构体DL-GSH、DL-Hcy及DL-Cys,探讨这三种巯基化合物对映异构体与AMI危险因素相关性,进一步筛选出诊断AMI新的生物标志物,为AMI诊断提供新的参考指标。2.通过动态监测AMI患者血清中DL-GSH、DL-Hcy及DL-Cys随治病情好转的浓度变化,探讨内源巯基化合物的对映异构体评价AMI患者的治疗效果的可行性。方法:1.选取2020年12月-2021年1月因胸痛就诊于延边大学附属医院胸痛门诊,诊断为AMI住院患者30例（ST段抬高型25例,非ST段抬高型5例）,采集AMI组患者入院即刻（入院第1天）肘静脉血5ml;选取AMI组患者中符合予以急诊经皮冠状动脉介入（Percutaneous coronary intervention,PCI）治疗条件的20例患者（ST段抬高型15例,非ST段抬高型5例）,住院期间予以抗血小板聚集、抗凝、稳定斑块及预防心室重构等AMI的规范化治疗后好转出院,收集该20例患者入院后第3天、第5天及第8天清晨空腹肘静脉血5ml;同时段在延边大学附属医院参加健康体检的志愿者中随机选取与AMI组年龄、性别相匹配且无冠心病的30例作为对照组,同样采集空腹肘静脉血液5ml,上述血液样均在采集后2小时内完成离心,留取血清并标记后置于-80℃的低温冰箱,集中检测。2.收集一般临床资料:AMI组和对照组的性别、年龄、吸烟史及合并疾病（高血压、糖尿病等）情况等。3.基于新型质谱手性衍生化试剂（R）-（5-（3-异硫氰基吡咯烷酮-1-基）-5-氧戊基）三苯基磷（（R）-（5-（3-isothiocyana-topyrrolidin-1-yl）-5-oxopentyl）triphenylphosphonium,NCS-OTPP）采用超高液相色谱质谱法（Utrahigh pressure liquid chromatography-mass spectrometry,UHPLC-HRMS）法靶向识别血清中内源性巯基化合物GSH、Hcy及Cys并进行手性拆分,测定D-GSH、L-GSH、D-Hcy,L-Hcy、D-Cys及L-Cys的浓度水平（单位umol/l）。4.新型利用统计分析比较对照组与AMI组入院即刻（入院第1天）D-GSH、L-GSH、D-Hcy、L-Hcy、D-Cys及L-Cys的浓度水平是否存在差异,通过二元Logistic回归分析探讨D-GSH、L-GSH、D-Hcy、L-Hcy、D-Cys及L-Cys是否为AMI发生的危险因素并识别候选生物标志物,进一步通过ROC曲线评估候选生物标志物诊断AMI潜力;动态监测AMI组中的20例患者入院后第1天、第3天、5天及第8天（即治疗前期、治疗中期及出院前）经手性拆分后的巯基化合物的对映异构体浓度随着病情好转的变化趋势,进一步判断趋势与AMI的治疗效果的关系。结果:1.AMI组与对照组在性别、年龄、吸烟史、高血压患病率及糖尿病患病率无明显统计学差异（P＞0.05）。2.对照组与AMI组入院第1天血清对映异构体水平的比较:经手性拆分后的巯基化合物L-GSH、D-Hcy、L-Hcy、D-Cys及L-Cys在AMI组及对照组间被检测,未检测到D-GSH。在AMI组L-GSH浓度水平显著低于对照组（2.67±0.57umol/l vs 3.18±0.41 umol/l,P＜0.05）;AMI组L-Cys（339.88±45.68 umol/l vs290.31±38.12 umol/l,P＜0.05）、D-Hcy（0.10±0.05 umol/l vs 0.07±0.02 umol/l,P＜0.05）及L-Hcy（13.33±4.39 umol/l vs 8.06±1.71 umol/l,P＜0.05）浓度水平显著高于对照组;D-Cys浓度水平在AMI组与对照组比较无统计学差异（0.89±0.22umol/l vs 0.83±0.19 umol/l,P＞0.05）。3.二元Logistic回归分析:组间有显著差异的指标L-GSH、D-Hcy、L-Hcy及L-Cys经二元Logistic回归分析示L-Cys（OR=3.919,95%CI:1.040-14.765,P＜0.05）、D-Hcy（OR=3.287,95%CI:1.083-9.981,P＜0.05）与L-Hcy（OR=63.305,95%CI:5.492-776.5,P＜0.05）是AMI发生的危险因素。4.ROC曲线分析对D-Hcy、L-Hcy及L-Cys诊断AMI的价值评价:D-Hcy、L-Hcy及L-Cys作为诊断AMI的候选标志物,L-Hcy诊断AMI的曲线下面积0.9033（95%CI:0.799-0.964,P＜0.05）,临界值为9.150 umol/l,灵敏度为0.867,特异度为0.833;D-Hcy诊断AMI曲线下面积0.6906（95%CI:0.558-0.804,P＜0.05）,临界值为0.065 umol/l,灵敏度为0.700,特异度为0.567;L-Cys诊断AMI的曲线下面积0.8100（95%CI:0.703-0.917,P＜0.05）,临界值为348.445 umol/l,灵敏度为0.533,特异度为0.933。5.AMI组中予以急诊PCI患者的20例,动态监测经手性拆分后的巯基化合物对映异构体的浓度,利用折线图分析其趋势变化,D-Hcy、D-Cys及L-GSH的浓度随病情好转呈先上升后下降的趋势,L-Cys的浓度呈持续升高的趋势,而L-Hcy的浓度呈逐渐下降的趋势。结论:1.D-Hcy、L-Hcy及L-Cys是AMI发生的危险因素,对AMI的发生有一定的预测作用。2.L-Hcy对AMI的诊断有特异度高、敏感性强的特点,因此L-Hcy有望可作为诊断AMI新型生物标志物。3.AMI患者血清中L-Hcy浓度随病情好转呈现逐渐下降趋势,因此推测通过对血清L-Hcy浓度动态监测有助于评价AMI患者的治疗效果。