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目的:(1)取冻存的骨肉瘤细胞复苏后体外培养建立细胞模型,为后续研究提供实验基础。(2)观察依托泊苷和顺铂两药单独及联合用药对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨依托泊苷联合顺铂对肉瘤细胞增殖和凋亡的作用,为骨肉瘤的治疗提供新方案。方法:(1)取冻存骨肉瘤细胞,经过复苏、培养、传代等步骤,观察细胞的生长情况。(2)①不同浓度的依托泊苷及顺铂单独或联合作用于生长良好的骨肉瘤细胞,培养24h、48h、72h后,使用MTT法检测各实验孔的光密度值(OD值)。②倒置相差显微镜观察空白对照组、依托泊苷组、顺铂组和两药联合组的细胞形态和生长增殖情况变化。③用流式细胞仪检测两药单独及联合作用于骨肉瘤细胞后细胞的凋亡情况。结果:(1)冻存的骨肉瘤细胞,经复苏、培养、传至第三代,得到生长旺盛、活性好的骨肉瘤细胞。倒置显微镜下观察,细胞具有典型的骨肉瘤细胞形态。(2)①MTT法结果:各组药物均对骨肉瘤细胞的生长有抑制作用,在一定范围内随药物浓度增加和作用时间延长而增强,具有明显的时间和剂量依赖性。与两药单独使用相比较,联合用药更能有效抑制骨肉瘤细胞增殖。②倒置相差显微镜下观察,传至第三代的骨肉瘤细胞生长旺盛,活力好,具有典型的骨肉瘤细胞形态。加药后倒置显微镜下观察:空白对照组骨肉瘤细胞呈多角形,核圆,细胞贴壁生长良好。单用依托泊苷及顺铂时,骨肉瘤细胞形态呈不规则,表现出不同程度的细胞皱缩,边缘毛糙,部分细胞的染色质固缩,聚集于细胞核的边缘,胞浆浓缩。少量细胞凋亡脱落呈圆形,悬浮于细胞培养基中。两药联用时可见大量细胞凋亡脱落且悬浮于培养液中,只剩少数形态不规则细胞贴壁。③流式细胞仪结果:单一用药组与对照组比较,检测细胞凋亡率差异有显著性(P<0.05)。两药联合组与单一用药组比较,检测细胞凋亡率差异有显著性(P<0.05)。结论:(1)依托泊苷与顺铂联合用药可以显著抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡。(2)依托泊苷与顺铂联合用药对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用在一定范围内随药物浓度增加和作用时间延长而增强,具有明显的时间和剂量依赖性。(3)依托泊苷联合顺铂对骨肉瘤细胞增殖作用的增强可能是通过二者协同促进细胞凋亡作用产生的。