维拉帕米,尼莫地平及三七总皂甙对大鼠晶状体上皮细胞增殖及细胞外基质合成的影响

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目的:本实验的目的旨在观察钙通道阻滞剂(calcium channel blockers,CCB):维拉帕米(verapamil,Ver),尼莫地平(nimodipine,Nim)及中药成分:三七总皂甙(total saponins of panax notoginseng,Pns)对大鼠晶状体上皮细胞(rat lens epithelial cells,RLECs)增殖及细胞外基质(extracelluar matrix,ECM)合成的影响,为药物治疗后发障提供理论基础和实验依据。方法:取80只SD新生鼠(5-8天鼠龄)晶状体行消化法和组织块法原代培养,用传代的2-3代RLECs在96孔板中培养24h,分别加入不同浓度的Ver,Nim和Pns三种药物,培养24h,48h,72h后应用四甲基偶氮唑盐3-(4,5-dimethy1-thiazo1-2-yL)-2,5-dipheny1 tetrazolium bromide,MTT)显色法观察Ver,Nim,Pns对大鼠晶状体上皮细胞增殖的影响;用传代的2-3代RLECs在24孔板中培养24h,分别加入不同浓度的Ver,Nim和Pns三种药物,培养24h,48h,72h后应用免疫组织化学SP法检测Ver,Nim,Pns三种药物对细胞外基质(ECM):层粘连蛋白(Laminin)及IV型胶原(Ⅳ collagen)表达的影响;分别取6只SD成年鼠及6只SD新生鼠(5~8天鼠龄)的眼球进行石腊包埋切片,应用免<WP=6>疫组织化学SP法检测晶状体IV型胶原(Ⅳ collagen)的表达。结果:1:随着Ver,Nim,Pns三种药物浓度的增加,大鼠晶状体上皮细胞增值率均分别减少,以72小时为明显。其中Ver,Nim两种药物在48小时与24小时之间没有显著性差异,但72小时与24小时之间有显著性差异;Pns药物在48小时,72小时均与24小时之间有显著性差异。2:随着Ver,Nim,Pns三种药物浓度的增加,大鼠晶状体上皮细胞层粘连蛋白表达减少,且药物在48小时,72小时均与24小时之间有显著性差异。3:在本实验中,通过细胞培养组及动物眼球切片组免疫组织化学SP法均未检测到Ⅳ型胶原的表达,而在动物眼球切片组的角膜组织有Ⅳ型胶原的表达。结论:本研究通过MTT法证实了Ver,Nim,Pns三种药物均对RLECs有增殖抑制作用,并随浓度及时间增加而增强,但三种药物间无明显的差异性;三种药物对大鼠晶状体上皮细胞合成层粘连蛋白(Laminin)有抑制作用;在本研究中未检测到大鼠晶状体IV型胶原(Ⅳ collagen)的表达。
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