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对上海白猪精液的冷冻分装方法、冷冻方法、稀释液及添加剂、甘油浓度、精子密度、解冻温度及时间等技术环节进行了研究,并对冻融前后的精子进行了电镜观察,记录了试验过程中的温度,描绘了不同的冷冻温度曲线。旨在探索猪精液5 ml细管冷冻保存技术体系,为猪精液冷冻保存及商业化生产提供技术支撑。试验结果如下: 猪精液颗粒、0.25 ml细管、5 ml细管之间,冷冻后精子活力和活率的差异不显著(P>0.05)。0.25 ml细管冻后精子弯尾率和顶体完整率显著高于颗粒(P<0.05),但与5 ml细管之间差异不显著(P>>0.05)。按不同的始冻温度、平衡温度、入氮温度绘制了三种精液冷冻方式的冷冻温度曲线。 在使用的四种稀释液中,4号(LEY)稀释液冷冻解冻后的精子活力、弯尾率和顶体完整率显著高于其他三种稀释液(P<0.05),活率极显著高于其他三种稀释液(P<0.01)。 比较5 ml细管冷冻甘油终浓度为1%、2%、3%、4%、5%的稀释精液,2%、3%的甘油浓度能有效保护冻后精子活力、活率和顶体,1%~3%的甘油浓度能有效保护精子质膜。 5 ml细管冷冻时距离液氮面不同高度冷冻,距离液氮面3 cm高冷冻,熏蒸时温度回升幅度较小,解冻后的精子质量高于距离液氮面5 cm高冷冻,但二者差异不显著(P>0.05)。并分别绘制两者的冷冻温度曲线。 稀释液添加剂试验表明,0.05%、0.1%的N-乙酰-D-氨基葡萄糖能有效保护精子顶体,咖啡因提高了精子的冻后活力(P>0.05),2~8 mmol/L咖啡因显著降低了冻后精子的弯尾率(P<0.05),2%、5%安钠咖可显著提高精子的冻后活力(P<0.05)。 5 ml细管冷冻密度分别为2.0×10~9个/ml、1.5×10~9个/ml、1.0×10~9个/ml的猪精子,解冻后精子质量差异不显著(P>0.05)。 干解法和湿解法解冻颗粒冻精的效果差异不显著(P>0.05)。5 ml细管冻精在不同温度、不同时间解冻,随着解冻温度的升高,解冻后精子活力和活率也升高,弯尾率先升高后降低,且较高的解冻温度对精子顶体有害。在所有解冻组中52℃35s和45℃70s是解冻效果最好的组合。 本试验推荐的猪精液5 ml细管冷冻保存程序为:用LEY稀释液稀释精液,甘油终浓度为2%、精子密度为2.0×10~9个/ml,5 ml细管分装后距离液氮面3 cm处冷冻,52℃35s解冻。稀释液中可添加0.05%或0.1%N-乙酰-D-氨基葡萄糖及2%或5%安钠咖。