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目的：探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)分离培养、体外扩增及诱导向软骨细胞分化的影响因素；探索天然生物材料丝素蛋白(silk fibroin,SF)和壳聚糖(Chitosan,CS)混合制备SF-CS支架材料的理化性质及生物相容性。方法1、抽取兔骨髓液,分离纯化骨髓液中的间充质干细胞,MTT方法检测1-5代细胞生长活性。取扩增传代至第3代的BMSCs分实验组和对照组,实验组用10%胎牛血清的HG-DMEM培养液加入转化生长因子-β1、地塞米松及抗坏血酸联合诱导,对照组用10%胎牛血清的HG-DMEM培养液自然分化,在诱导4天、7天、14天后,分别用甲苯胺蓝染色检测细胞糖胺聚糖的表达,免疫组化染色检测细胞Ⅱ型胶原的表达。2、将蚕丝脱胶、溶解并提纯得到适当浓度的丝素蛋白溶液,将丝素蛋白溶液与壳聚糖溶液不同比例混合成A、B、C和D组,真空冷冻干燥法制备成SF-CS支架材料,用1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)／N-羟基丁二酰亚胺(NHS)／吗琳-乙磺酸(MES)作为交联剂,采用液体替代法检测SF-CS支架材料空隙率,扫描电镜观察其超微结构,热水溶失方法检测各组支架交联前后热水溶失率；将诱导后的软骨细胞与支架材料浸提液混合培养,MTT方法检测支架对细胞的毒性作用；用诱导向软骨细胞分化细胞接种各组材料分为A组、B组、C组、D组材料及单纯培养板组,在各时间点用细胞计数及MTT方法检查细胞贴附率及细胞活力。结果：1、第1—3代传代细胞活细胞率约为96%,第4-5代细胞细胞活细胞率明显降低,BMSCs定向诱导后实验组细胞甲苯胺蓝染色异染,而Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性率与对照组相比有显著性差异。2、SF-CS支架具有不规则的多孔结构,交通孔丰富,各组平均孔隙直径在137-164μm之间,孔隙率在83-92%范围,经过交联剂处理过后材料热水溶失率明显降低,平均在23%左右。MTT检测支架材料细胞毒性结果分析显示：材料对细胞无毒性；细胞计数检测细胞粘附率及MTT检测细胞活性显示,各组材料之间及与平面培养组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05),B组(SF：CS=50：50)细胞粘附率及细胞活性均高于其他各组。结论：1、兔第3代BMSCS具有生长稳定,增殖速度快及克隆能力强,是较理想的软骨组织工程种子细胞,其经体外向软骨细胞诱导分化第7天Ⅱ型胶原蛋白表达最明显。2、SF-CS支架材料具有良好的生物学特性,两者的混合比例影响SF-CS生物活性,混合比例为50：50具有最好生物活性,可作为软骨组织工程的载体材料安全应用。