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转录因子E2F家族参与调控细胞周期、凋亡、分化、衰老及多倍体化等重要生物学过程,与人类肿瘤发生发展关系密切。E2F家族成员根据其结构和功能的不同可分为典型性和非典型性两类,典型性的E2F成员E2F1-6,它们都含有与DP蛋白等作用的结构域,受RB-E2F信号通路的调控；非典型性E2F成员E2F7、E2F8,它们不与DP蛋白等作用,仅含有两个DNA结合结构域,不受RB的调控。本论文在课题组前期关于非典型性E2F家族成员在人类肝细胞癌生长中作用的研究结果的基础上,进一步探讨非典型E2F家族成员E2F7和E2F8基因对肝癌细胞分化的影响及相关分子机制。通过能够体外富集肿瘤干细胞的细胞成球培养技术。我们观察了E2F7和E2F8基因对肝癌细胞Hep-3B、Huh-7成球培养条件下的克隆形成能力影响。结果发现,含E2F7、E2F8基因的腺病毒载体能够显著抑制Hep-3B细胞成球培养条件的克隆形成能力；相反,特异性干扰E2F8的腺病毒载体则能够显著促进Hep-3B细胞成球培养条件下的克隆形成能力。同时,我们通过定量PCR, Western blotting技术检测了E2F7、E2F8基因在肝癌细胞中表达受到干扰时,NANOG、SOX2、OCT-4基因表达上升。当E2F7、 E2F8基因表达上调时,相关干细胞表面标志物表达下降。这些结果说明了非典型性E2F家族成员在肝癌的分化中发挥作用。为了进一步深入研究它们在肝癌分化中涉及的分子机制,我们研究了E2F7、E2F8基因与细胞分化相关的PcG复合物、Wnt通路之间的关系。Western Blot检测分析E2F7、E2F8在肝癌细胞中过表达对PcG复合物中主要成员EZH2及其底物H3K27me3改变情况。结果显示过表达E2F7、E2F8可以抑制EZH2及其底物H3K27me3的表达。免疫共沉淀实验显示外源性的E2F7、E2F8可以与肝癌细胞中内源性的EZH2相互作用。此外,我们利用了TOP/FOP报告基因检测系统、实时荧光定量PCR、免疫荧光技术分析了E2F7、E2F8对Wnt信号通路活性、β-catenin的调控影响。结果发现,过表达E2F7和E2F8可以抑制β-catenin及其靶基因cyclinD1、c-myc的表达,影响β-catenin的入核及稳定性。我们的研究结果揭示了非典型性E2F家族成员在肝癌细胞分化中的作用及可能涉及的相关分子机制,为阐明肝癌发病的分子机制及临床肝癌的分化治疗提供理论基础。