论文部分内容阅读
研究背景尖锐湿疣(CA)是由人乳头瘤病毒(HPV)引起的一种常见性传播疾病,该病对患者的身心健康、生殖健康和家庭幸福造成较大的危害。超过90%的外生殖器疣与低危型HPV6和11两种亚型有关。近年来尖锐湿疣发病率不断上升,其中亚临床感染和潜伏感染远多于典型尖锐湿疣,且HPV亚临床和潜伏感染者也具有传染性,对尖锐湿疣的流行、传播、病程以及转归有一定的影响。临床工作中亟需一种操作简便、准确度高的检测方法。然而目前HPV的临床检测手段不尽理想,尖锐湿疣诊断,尤其在HPV亚临床和潜伏感染的诊断缺乏便捷而准确的方法,易造成误诊与漏诊。HPV病原学检测如核酸分子技术,因实验室要求高等原因,无法在临床尤其基层医院作为常规检验项目开展。曾有研究用HPV壳蛋白L1抗体免疫组化检测HPV感染,发现其阳性检出率较低而未能应用于临床诊断。本研究评估了自主研发的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体对尖锐湿疣皮损HPV感染的检测意义和临床应用可能性。目的采用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体,检测外生殖器尖锐湿疣皮损组织中HPV6b和11型E7蛋白的表达,观察与尖锐湿疣临床诊断及RT-PCR检测结果的符合率,探讨该两型抗体在临床HPV检测中的应用价值。方法1.收集2013年9月至2014年10月间在杭州市富阳区第一人民医院皮肤科确诊的尖锐湿疣病例55例。常规消毒,局麻下用血管钳夹取全部或部分疣体组织标本,经生理氯化钠溶液冲洗,置入10%福尔马林中固定,常规组织病理检查,HE染色。其中18例患者同时取疣体组织-80℃冰冻保存。2.55例尖锐湿疣皮损石蜡标本,用HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体进行免疫组化法染色检测。镜下观察细胞染色情况,分析阳性染色的细胞中定位、染色强度和阳性细胞百分比。3.18例尖锐湿疣皮损冰冻标本用RT-PCR法测定HPV6b、11E7蛋白的mRNA表达情况,分析与免疫组化结果的符合率。结果55例尖锐湿疣皮损的免疫组化染色显示HPV6b和11E7蛋白为胞核染色,而且皮损全层表皮细胞均可见阳性表达细胞,但以基底层较多。其中HPV6bE7和HPV11E7蛋白阳性表达病例分别为42例(阳性率76.36%)和32例(阳性率58.18%)。HPV6b型和11型E7蛋白总阳性表达病例为52例(总阳性检出率94.55%),其中两蛋白双阳性表达22例(双阳性率40.00%)。两蛋白均阴性表达为3例(阴性率5.45%)。42例HPV6b E7阳性表达病例中有20例为HPV11E7表达阴性；32例HPV11E7阳性表达病例中有10例为]HPV6bE7表达阴性。18例尖锐湿疣冰冻标本经RT-PCR法检测,HPV6bE7和HPV11E7的mRNA表达阳性分别为15例和10例,双阳性表达7例。阳性表达型别与免疫组化结果完全一致。讨论用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体免疫组化检测55例CA标本,可以直观地观察到HPV6b和11型E7蛋白阳性表达细胞散在分布于皮损表皮各层,且主要为胞核染色。HPV6b和11 E7的总阳性检出率达94.55%,明显高于HPV壳抗原免疫组化阳性检出率,并与文献报道的超过90%的尖锐湿疣由低危型HPV6和11两种亚型感染所致的流行病学结论相符合。本研究提示,自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体免疫组化检测尖锐湿疣标本的阳性率很高。用这两型HPVE7抗体进行的免疫组化检测还发现,HPV11型E7阳性表达的组织中仅部分表现为HPV6b型E7表达阳性,反之亦然。提示该两型抗体间无交叉反应。对其中18例患者皮损组织平行进行HPV6b和11型的E7 mRNA的RT-PCR法检测,研究表明其阳性检出率及阳性表达型别与免疫组化的结果完全一致,提示该两型抗体对尖锐湿疣皮损组织中HPV6b、11的免疫组化法检测型特异性很强。结论该自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体对尖锐湿疣皮损中HPV6b和11型感染检出率很高,敏感性好,特异性强。未发现两抗体有交叉反应,且可以直观地观察病损组织中HPV病毒感染细胞,将有助于尖锐湿疣的临床诊断。由于免疫组化方法相对简便,便于临床推广应用。