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脂质体是一种人工合成的具有双层膜的磷脂质小囊和赋形剂。脂质体可以作为以提高抗原的输送和递呈为主要作用的免疫佐剂。其主要优势是脂质体膜对细胞膜具有良好的亲和性,极易将包被在脂质体上或内部的药物或抗原成分输入到细胞内。另外,脂质体还能延长药物的作用时间,降低药物的毒性和减少药物的副作用等。研究发现,许多中药或中药有效成分不溶于水,或者在体内代谢快、不能持续发挥药效作用,若用脂质体对其包封,不仅能够解决这些问题,同时还能发挥两者的优势。本研究利用脂质体的包封技术,采用薄膜分散超声法,将淫羊藿多糖(epimedium polysaccharide,EPS)制备成一种新型的免疫佐剂即淫羊藿多糖脂质体(epimedium polysaccharide liposome, EPSL),通过正交试验设计原理,筛选出制备EPSL的最佳处方；通过体内和体外试验,研究了EPSL对鸡淋巴细胞增殖、抗体效价及细胞因子分泌及mRNA表达等方面的影响,旨在研制高效、低毒的免疫增强剂。试验分为以下五个部分：.试验Ⅰ淫羊藿多糖脂质体制备条件的优选为了优选EPSL制备的最佳条件,采用薄膜分散超声法制备EPSL,以包封率和载药量为指标,以脂药比、膜材比、超声时间和载药温度为因素水平,用L9(34)正交试验对制备条件进行优选,并用鱼精蛋白法测定EPSL的包封率。结果显示,制备EPSL的最佳条件为脂药比30：1,膜材比4：1,超声时间10min,载药温度40℃。表明采用最佳条件制备的EPSL,包封率和载药量均较高。试验Ⅱ淫羊藿多糖脂质体体外对鸡淋巴细胞增殖的影响将EPSL和EPS分别用RPMI1640培养液稀释11个浓度,加入到体外培养的鸡外周血淋巴细胞中,在培养48h后用MTT法判定各试验药物的安全浓度和对细胞增殖的影响；另将自安全浓度以下5种浓度的EPSL和EPS分别加入到体外培养的鸡外周血淋巴细胞中,培养48h后,用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明,各试验药物的安全浓度较低；其中EPSL和EPS均能促进淋巴细胞增殖,EPSL在62.5-3.906μg·mL-1时无论是单独作用还是协同PHA作用均能显著促进鸡外周血淋巴细胞的增殖,并且在31.25μg·mL-1和3.906μg·mL-1时,效果都显著优于EPS。试验Ⅲ淫羊藿多糖脂质体体外对鸡细胞因子mRNA表达的影响为了研究EPSL增强免疫的作用机理,测定了EPSL对鸡细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)mRNA表达的影响,以EPS作为对照。培养鸡外周血淋巴细胞,分别加入3种浓度的EPSL,培养36h后收集细胞,提取总RNA,用实时荧光定量PCR方法测定细胞因子mRNA的表达。结果表明,在62.5μg·mL-1和31.25μg·mL-1时,EPSL对3种细胞因子的诱生作用显著强于EPS,其中EPSL在62.5μg·mL-1时的作用最强,EPSL在31.25μg·mL-1时次之,并与剂量呈正相关。这可能是EPSL增强机体免疫的分子机制之一。试验Ⅳ淫羊藿多糖脂质体对鸡新城疫疫苗免疫应答的影响为了比较EPSL和EPS的增强免疫作用,测定了EPSL和EPS对鸡新城疫苗免疫效果的影响。14日龄雏鸡210只,随机均分为7组,用新城疫Ⅳ系苗滴鼻、点眼免疫,28日龄二免。在首免的同时,3个试验组分别肌肉注射高、中、低剂量的EPSL1个多糖对照组注射EPS,疫苗组和空白对照组注射等量生理盐水,空白对照隔离饲养。分别于首免后第7、14、21、28d心脏和翼静脉采血,用MTT法和B-微量法测定外周血T淋巴细胞增殖和血清HI抗体效价的变化。结果表明,EPSL在合适的剂量和某些时间点能显著促进T淋巴细胞增殖、提高血清抗体效价。可以得出,EPSL显著提高了EPS的药效以及佐剂活性,综合评价以EPSLH最好。试验V淫羊藿多糖脂质体对鸡血清中细胞因子水平的影响为了进一步研究EPSL增强免疫作用的机理。14日龄鸡210只,随机均分为7组,用新城疫Ⅳ系苗滴鼻、点眼免疫,28日龄二免。在首免的同时,3个试验组分别肌肉注射高、中、低剂量的EPSL,1个多糖对照组注射EPS,疫苗组和空白对照组注射等量生理盐水,空白对照隔离饲养。分别于首免后第14、21和28d翼静脉采血,应用双抗体夹心法测定细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的含量变化。结果表明,EPSL在合适的剂量和某些时间点均能显著提高细胞因子的含量,综合评价以EPSLH最好。