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目的:
通过观察急性脑梗塞大鼠梗死后脑组织环氧合酶(Cyclooxygenase-2,COX-2)、S-100β蛋白的表达、血清一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量及神经功能情况,探讨逐痰通络汤对急性脑缺血损伤的作用及可能机制。
方法:
清洁级雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(n=24)、对照组(n=24)、药物组(n=24),每组再分为脑缺血1d、3d、7d、14d组,每组6只。选用大黄、胆南星、郁金、天竹黄、石菖蒲、天麻、地龙、全蝎组成“逐痰通络汤”,中药水煎浓缩为3g/ml,与术前五天开始灌胃给药,大鼠给药的剂量是根据临床成人口服剂量换算为大鼠灌胃剂量12g/(kg·d),2次/天,对照组给予等量生理盐水,假手术组自由饮水。应用线栓法建立大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,术后2小时待大鼠清醒后采用Bederson6级5分法进行神经功能评分,取评分为1-4分的入组。假手术组除不插线外,其余步骤同实验组,评分一般0分。在指定的时间点进行神经功能评分后断头取脑,取新鲜的血清,做标本待用。参考Bederson6级5分法进行神经功能评分,免疫组化染色SABC法检测脑组织COX-2的表达及分布、S-100β的表达,用硝酸还原酶法检测血清NO的含量。
结果:
①神经功能评分:除假手术组之外,其余各组大鼠在手术结束麻醉清醒之后均出现一定程度的神经功能缺损症状,与假手术组比,有显著差异(P<0.01)。梗死后第3天评分最高,第14天评分最低,与对照组比较,药物组得分较低,其中第7天、14天降低更明显,差别有统计学意义(P<0.05)。
②脑组织COX-2阳性表达:COX-2阳性细胞胞浆染色呈棕色。(1)分布:在脑梗死后Cox-2阳性神经元多位于梗死边缘及其皮层和海马区,而在梗死中央区缺如.在对侧(正常脑半球)皮层也有少量阳性细胞表达.(2)COX-2阳性表达具有一定的时间性,随着时间的延长逐渐降低。其在术后第1天大量表达,第3天表达仍持续较高,但较第1天已明显下降,第7天显著下降,第14天基本恢复正常。(3)与假手术组比较,药物组及对照组阳性表达明显增多,有显著差异(P<0.01)。与对照组相比,药物组各时间点COX-2的表达均减少,其中第1天、3天减少更明显,有统计学差异(P<0.05)。
③脑组织S-100β阳性表达:S-100β阳性细胞细胞核呈棕色。药物组、对照组各时间点阳性细胞数增多,表达强度增加,在第1天升高,第3天达高峰,第7天开始下降,第14天基本恢复正常;与假手术组比较有显著差异(P<0.01)。与对照组比较,药物组阳性细胞表达强度在各时间点均较对照组低,其中第3天、第7天有统计学差异(P<0.05)。
④血清一氧化氮含量:术后血清一氧化氮(NO)浓度在第1天升高,第3天达高峰,第7天开始下降,第14天基本恢复正常。与假手术组相比,对照组和药物组表达明显升高,有显著差异(P<0.01)。与对照组相比,药物组各时间点NO水平均减低,其中第3天有统计学差异(P<0.05)。
结论:
逐痰通络汤对急性局灶性脑缺血引起的脑损伤具有一定的疗效,它可以改善缺血大鼠的神经功能,促进行为功能的恢复。
其保护机制可能为①抑制炎症反应,减少COX-2的表达,减少梗死边缘神经元迟发性死亡,起到神经保护作用.②抑制神经胶质细胞坏死,抑制S-100β蛋白的过量释放,抑制其神经毒性作用。③通过扩张血管,稀释血液,改善微循环,增加缺血区血液灌注,减少小胶质细胞增生,抑制iNOS过度表达,从而减轻了过量的NO对神经细胞的损伤作用。