香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)隶属软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、翼形亚纲(Pterimorpjia)、珍珠目(Pterioida)、牡蛎科(Ostreidae)、巨蛎属(Crassostrea),缺乏适应性免疫系统,主要依靠先天免疫系统抵抗外界病原的侵染,其中血淋巴的吞噬作用在清除病原过程中发挥着核心作用。本研究通过RACE、q RT-PCR、亚细胞定位、原核表达、血细胞计数、Edu增殖测定等手段,对香港牡蛎淋巴因子Tal进行结构和功能分析,探讨它们在香港牡蛎免疫防御过程中的作用。研究结果表明:1.香港牡蛎Tal基因的克隆与生物信息学分析Tal(T-cell acute lymphocytic leukemia)是一个参与造血和胚胎血管生成的重要转录因子,对于生物造血功能至关重要。为了研究Tal在香港牡蛎中的免疫功能,本研究采用RACE技术克隆了香港牡蛎Tal基因的c DNA全长序列,命名为Ch Tal,该基因全长812 bp,其中5’非编码区17 bp,3’非编码区135 bp,开放阅读框(ORF)660 bp,编码219个氨基酸,相对分子质量25.11 ku,理论等电点5.80。生物信息学分析结果显示,香港牡蛎Tal具有经典的b HLH保守结构域,Tal蛋白为疏水性蛋白质,且为非跨膜蛋白,有31个丝氨酸磷酸化位点、13个苏氨酸磷酸化位点、8个酪氨酸磷酸化位点,无糖基化位点,二级结构显示,α-螺旋占27.8%,β-折叠占4%,无规则卷曲占67.6%。多序列比对和系统进化树结果显示,Ch Tal基因与长牡蛎、美洲牡蛎和海蜗牛Tal同源性较高,证明了它是软体动物Tal家族的一个成员。2.香港牡蛎Tal组织分布和细菌感染下的表达模式荧光定量PCR结果显示,Ch Tal在香港牡蛎血淋巴细胞中表达量最高,其次是心脏、鳃、消化腺、闭壳肌、性腺,外套膜,暗示了其在淋巴细胞发生中的功能。在溶藻弧菌和溶血性葡萄球菌刺激后,Ch Tal表达量分别在12 h和6 h显著性上调,且分别在24 h(P<0.01)和12 h(P<0.01)达到最高水平,然后表达量逐渐下降。3.香港牡蛎Tal亚细胞定位及在血淋巴细胞再生中的功能亚细胞定位结果显示,Ch Tal在细胞核中表达。活体注射重组Ch Tal能够显著性地提高血淋巴细胞的数量,通过Edu增殖实验进一步证实了Tal具有促进香港牡蛎血淋巴细胞再生功能。综上所述,本研究初步揭示了香港牡蛎Tal参与了血淋巴细胞再生,这些研究结果在细胞和分子水平丰富了当前对香港牡蛎Tal的认知和鉴定,为研究血淋巴细胞的发生、发育、免疫功能及调控机制提供了良好的借鉴,为深入研究该基因在牡蛎抗病中的功能提供了依据。