【摘 要】
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支原体是肉羊呼吸道内常见的病原微生物,危害养羊业稳定发展,其在世界范围内分布广泛,造成了较大的经济损失。最近几年,江苏肉羊养殖业快速发展,但由于对羊传染性胸膜肺炎缺乏系统的认识与研究,使得肉羊支原体性肺炎的防控受到阻碍,一定程度上制约了养羊业的发展。本实验采集了江苏部分地区集约化肉羊养殖场肉羊鼻腔拭子样品,通过PCR方法对羊传染性胸膜肺炎进行分子流行病学调查。在此基础上,对传染性胸膜肺炎病原进行分
【基金项目】
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江苏现代农业（肉羊）产业技术体系（项目编号:JATS[2020]439）; 江苏现代农业（肉羊）产业技术体系（项目编号:JATS[2021]492）
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支原体是肉羊呼吸道内常见的病原微生物,危害养羊业稳定发展,其在世界范围内分布广泛,造成了较大的经济损失。最近几年,江苏肉羊养殖业快速发展,但由于对羊传染性胸膜肺炎缺乏系统的认识与研究,使得肉羊支原体性肺炎的防控受到阻碍,一定程度上制约了养羊业的发展。本实验采集了江苏部分地区集约化肉羊养殖场肉羊鼻腔拭子样品,通过PCR方法对羊传染性胸膜肺炎进行分子流行病学调查。在此基础上,对传染性胸膜肺炎病原进行分离鉴定和部分病原特性分析,为该病的防控提供一些数据支撑。1.江苏部分地区羊传染性胸膜肺炎的分子流行病学调查采集江苏6个地区羊场的羊鼻拭子样品920份。所有样品在快速增菌72 h后,通过煮沸法制备模板DNA。合成可同时检测丝状支原体山羊亚种、山羊支原体肺炎亚种、绵羊肺炎支原体、精氨酸支原体的通用引物,以PCR方法,对所采集的样品中是否携带支原体进行快速检测。结果显示,在920份鼻拭子样品,有109份（11.85%）样品PCR检测呈阳性。其中健康肉羊阳性样品28份（6.22%）,患病肉羊阳性样品81份（17.23%）,该结果提示临床健康肉羊呼吸道内也会携带支原体。从不同地区支原体检测结果看,阳性率最高的地区为灌云（24.37%）,最低的为高邮（5.00%）,可能与当地羊场日常卫生消毒或免疫接种情况有关。江苏6市总阳性率为11.85%,提示支原体感染较为严重。109份支原体阳性菌液特异性基因鉴定结果显示,共有86份（78.90%）为绵羊肺炎支原体阳性样品,有23份（21.10%）为精氨酸支原体阳性样品。该结果提示江苏地区胸膜肺炎支原体感染主要是绵羊肺炎支原体感染。2.羊传染性胸膜肺炎病原体的分离与鉴定取上述PCR快速检测为阳性的菌液,划线接种于支原体琼脂平板进行支原体的分离与纯化。37℃培养72～120 h后,通过对分离株的菌落形态、染色特性、生化特征以及通用引物的PCR鉴定发现,从109份阳性菌液中分离的19株细菌符合支原体特性。利用已发表的针对不同支原体的特异性引物,对19株支原体分离株进行PCR鉴定和扩增产物的序列分析,结果表明19株支原体中,10株为绵羊肺炎支原体,9株为精氨酸支原体。3.羊传染性胸膜肺炎病原体分离株的病原学特性分析选取生长良好且稳定传代的绵羊肺炎支原体（HMO1株）和精氨酸支原体（GYA2株）进行生长特性测定。结果显示,HMO1株在24～90h内处于对数生长期,132 h左右达到菌量峰值,170 h后进入衰退期;GYA2株在24～70 h内处于对数生长期,80 h达到菌量峰值随后进入平台期,130 h左右进入衰退期。选择其中的8株绵羊肺炎支原体和5株精氨酸支原体以微量稀释法进行药物敏感性实验。结果显示,共有7株支原体（5株绵羊肺炎支原体、2株精氨酸支原体）对延胡索酸泰妙菌素高度敏感,5株支原体（2株绵羊肺炎支原体、3株精氨酸支原体）对硫氰酸红霉素高度敏感,也有部分支原体对硫氰酸红霉素低度敏感,可能存在着对红霉素的耐药菌型,红霉素的选择使用需谨慎。选取绵羊肺炎支原体（HMO1株）和精氨酸支原体（GYA2株）进行鸡胚人工感染实验研究,结果显示鸡胚对绵羊肺炎支原体易感,鸡胚出现死亡;死亡鸡胚胚体充血出血,胚体较轻;根据鸡胚死亡情况,经SPSS数据分析计算,其LD50为2.44×108 CCU/mL。而精氨酸支原体不致死鸡胚,鸡胚无肉眼可见的病变,但感染组鸡胚胚体较小,体重较轻,与对照组差异极显著（P＜0.01）。
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