论文部分内容阅读
研究目的:本研究基于中西医结合研究方式,探究中药猪脬膜(urinary bladder matrix,UBM)修复皮肤损伤创面的现代医学作用机制,并与胶原蛋白真皮替代支架(PELNAC,PEL)进行对比,为中药“血肉有情之品”的药用价值增加新的科学论证,促进中医动物药的发展。研究方法:材料实验:(1)扫描电镜观察UBM及PEL的微观结构;(2)含尿素的缓冲液浸泡提取支架可溶性成分后进行SDS-PAGE实验,观察所含成分的蛋白分布情况。体外实验:(1)扫描电镜及免疫荧光染色探究细胞在支架上的黏附及运动生长的情况;(2)划痕及Transwell法检测浸提液对细胞迁移运动的影响;(3)流式细胞术检测浸提液对巨噬细胞极化的影响。体内实验:(1)小鼠体内埋植实验探究内源性细胞在支架上生长及周围微环境的影响;(2)H&E染色观察细胞在支架中的浸润情况;(3)抗ER-TR7、F4/80、α-SMA免疫组化染色及F4/80,CD86,CD206免疫荧光染色评估浸润细胞类型及活化情况;(4)抗TGF-β1、VEGF、MMP-9及Col-I免疫组化染色评估植入后的微环境及支架重塑情况。研究结果:1.UBM一面为致密的基底膜结构,另一面为含有纤维结构的多孔固有层。PEL上下两面均呈三维多孔结构。尿素缓冲液浸提的UBM中发现大量非Ⅰ型胶原蛋白活性成分。2.UBM在体外更能以非血清依赖的方式促进种植于其表面的成纤维细胞黏附及长入。其浸提液同样也在黏附、迁移方面对成纤维细胞及巨噬细胞表现出明显的促进作用,同时也明显促进巨噬细胞向M2型极化。3.UBM植入体内后同样表现出显著增强的快速内源性细胞向内生长活性,促进成纤维细胞及巨噬细胞的浸润及活化,同时营造了富含TGF-β1、VEGF的微环境,诱导细胞活化,生成Ⅰ型胶原,促进支架重塑,从而促进原位组织再生。研究结论:1.UBM具有更显著的促进成纤维细胞黏附、迁移、活化以及促进巨噬细胞运动和向M2型极化的生物活性,增强细胞对支架的重塑能力和原位组织新生的能力,从而改善修复的重塑性微环境,促进支架建设性重塑,其作用机制可能与UBM的非Ⅰ型胶原蛋白活性成分的调控作用有关。2.中药“血肉有情之品”的部分优势功能是人工合成物所无法替代的。3.应探索更多中医动物药的现代医学作用机制,增加其科学依据,从而推进中医的发展。