论文部分内容阅读
收集了全国26份姬松茸和29份灰树花茵种,筛选出高多糖的姬松茸和灰树花品种,并研究其多糖的生物活性,主要结果如下:1.通过RAPD、SRAP、ISSR分子标记和ITS序列扩增对26（A01～A26）份姬松茸菌种过行多态性分析,综合四种分子标记的结果,采用类平均法（UPGMA）进行聚类分析,姬松茸可分为4大类.其中第2类的A08和A10茵种间的相异系数为0;第3类的A15、A16、A17菌种间的相异系数为0;第4类的A20、A21、A22菌种间的相异系数为0;这些菌种是同种异名,为同一个栽培种.通过RAPD、SRAP和ISSR的综合聚类分析,29份灰树花菌种（G01～G29）可分为8大类.其中第3类的G15与G16菌种间的相异系数为0;第8类的G07和G10菌种间的相异系数为0;第8类的G14、G18、G21、G26、G27菌种间的相异系数为0;这些菌种是同种异名,为同一个栽培种.2.采用正交法,对热水浸提法,超声辅助热水浸提法及微波辅助热水漫提法的姬松茸、灰树花多糖提取工艺进行了优化.姬松茸多糖热水浸提法的最佳工艺为:pH值7.5,料水比为1∶20,提取温度为100℃,提取时间为4 h,醇沉浓度为100%,多糖提取率为12.17%,多糖含量为64.84%.超声辅助热水浸提法的最佳条件为:超声功率600W,超声时间4min,漫提时间2h,多糖提取率为13.76%,多糖含量为54.97%;应用超声波可提高姬松茸多糖提取率13.06%,但是多糖含量下降了9.87%.微波辅助热水浸提法的最佳条件为:中功率,微波时间4min,水提2h,多糖提取率为14.13%,多糖含量为66.29%;应用微波可提高姬松茸多糖提取率16.10%,对多糖含量没有显著影响.灰树花多糖热水浸提法的最佳工艺为:pH值7.5,料水比为1∶20,提取温度为100℃,提取时间为4 h,醇沉浓度为95%,多糖提取率为7.08%,多糖含量为73.49%.超声辅助热水浸提法的最佳条件为:超声功率400W,超声时间6min,浸提时间2h,多糖提取率为8.04%,多糖含量为58.60%;应用超声波可提高灰树花多糖提取率13.56%。但与热水浸提法相比,多糖含量下降了14.89%.微波辅助热水浸提法的最佳条件为:高功率,微波时间4min,水提2h,多糖提取率为9.17%,多糖含量为70.41%,应用微波可提高灰树花多糖提取率29.52%,对多糖含量没有显著影响.3.对4类姬松茸品种和8类灰树花品种的多糖进行提取测定.筛选出高多糖姬松茸品种“AB01”,其发酵胶多糖含量达2.05mg/ml,是应用面积最广品种“N-2”（1.44mg/ml）的1.42倍,是平均值（1.27mg/ml）的1.61倍,是多糖含量最低品种“AB03”（0.61mg/ml）的3.36倍.该品种的深层发酵产量高,胞内多糖含量为12.04%,胞外多糖含量为1.54mg/ml.筛选出高多糖灰树花品种“GF06”,其发酵胶多糖含量达1.65mg/ml,是应用面积最广品种“52”（0.65mg/ml）的2.53倍,是平均值（0.59mg/ml）的2.79倍,是多糖含量最低品种“GF03”（0.22mg/ml）的7.50倍.该品种胞内多糖含量为7.22%,胞外多糖含量为0.98 mg/ml.4.通过构建小鼠S180荷瘤模型对姬松茸和灰树花及复合多糖组分进行抗肿瘤作用研究.姬松茸组中:“AB01”的发酵胶多糖（AB01-P）对小鼠S180肿瘤有极显著的抑制活性,与剂量呈正相关,高剂量组的抑瘤率为45.36%;高于“AB03”的发酵胶多糖（AB03-P）的最佳抑瘤率（25.14%）、“AB01”的胞内多糖（AB01-P-1）的最佳抑瘤率（36.61%）、“AB01”的胞外多糖（AB01-P-2）的最佳抑瘤率（30.05%）.灰树花组中:“GF06”的发酵胶多糖（GF06-P）有极显著的抑制S180肿瘤活性,与剂量呈正相关,高剂量组的抑瘤率为42.08%;高于“GF03”的发酵胶多糖（GF03-P）的最佳抑瘤率（26.78%）、“GF06”的胞内多糖（GF06-P-1）的最佳抑瘤率（38.25%）、“GF06”的胞外多糖（GF06-P-2）的最佳抑瘤率（39.89%）.“AB01”和“GF06”发酵胶复合多糖（AG-P）低、中剂量组的抑瘤率呈剂量效应,高剂量组的抑瘤率较中剂量组没有提高,中剂量组的抑瘤率为49.18%.结果表明复合多糖组的抑瘤率较单个菌种多糖给药组略有提高.与对照组相比,姬松茸、灰树花及复合多糖各组分均可显著或极显著地提高S180荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数（免疫指标）.5.采用Annexin V/PI双染色流式细胞仪研究了高多糖姬松茸品种“AB01”发酵胶多糖（AB01-P）、高多糖灰树花品种“GF06”发酵胶多糖（GF06-P）和复合多糖（AG-P）对人骨肉瘤细胞株（MG-63）早期凋亡的影响.结果表明AB01-P可诱导MG-63细胞凋亡,且具有量效关系,2.0mg/ml剂量组的凋亡率为30.98%;GF06-P对MG-63细胞凋亡没有明显作用.AG-P对MG-63细胞有一定的凋亡作用,凋亡率为16.35%,不具剂量效应.6.应用RT-PCR技术,研究了AB01-P和GF06-P对人脐血粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因表达的影响。AB01-P有诱导人脐血单个核细胞表达GM-CSF的作用,最佳浓度为2.0μg/ml,从而证实了姬松茸多糖促进粒-巨噬细胞生成和调节动物机体免疫功能的分子机理.GF06-P对人脐血单个核细胞GM-CSF基因表达的诱导作用不明显.7.通过果蝇生存试验计数果蝇半数死亡天数、平均寿命、最高平均寿命;测定果蝇组织匀浆中的SOD（超氧化物歧化酶）值、MDA（丙二醛）含量和总抗氧化能力值.姬松茸组中:AB01-P对果蝇平均寿命的延长率最高,与对照组相比,对雄果蝇寿命的延长率达17.32%,对雌果蝇的寿命延长率为11.40%;对果蝇半数死亡的延长率为10.81%（雄）,10.21%（雌）;对果蝇平均最高寿命的延长率为15.91%（雄）,13.11%（雌）.灰树花组中:GF06-P能显著延长雌果蝇的平均寿命,延长率为为22.00%,对雄果蝇寿命的延长率为17.67%;对果蝇半数死亡的延长率为13.31%（雄）,19.71%（雌）;对果蝇平均最高寿命的延长率为12.74%（雄）,28.32%（雌）.复合多糖AG-P对雄果蝇的寿命延长率达23.78%;对雌果蝇寿命延长率为13.06%;显著延长雄果蝇平均最高寿命,延长率为20.77%,对雌果蝇平均最高寿命的延长率为19.01%.AB01-P能极显著提高雄果蝇的总抗氧化能力,提高率为28.89%,对雌果蝇没有影响.AB01-P-2能极显著提高雄性果蝇的SOD值,提高率为42.77%,但对雌果蝇没有影响;极显著提高雄雌果蝇的总抗氧化能力,提高率分别为68.89%、40.54%.GF06-P能显著提高雄果蝇的总抗氧化能力,提高率为17.78%;极显著提高雌果蝇的总抗氧化能力,提高率为48.64%.GF06-P-1可以显著降低雌性果蝇的MDA含量,极显著降低雄性果蝇的MDA含量;显著提高雌果蝇的总抗氧化能力,提高率为18.92%。GF06-P-2可以显著提高雄果蝇的SOD值,提高率为12.26%;极显著提高雌果蝇SOD值,提高率为38.41%.复合多糖（AG-P）可以显著降低雌性果蝇的MDA值,但对雄性果蝇没有显著影响.