[HNMP]HSO4催化合成圆头蒿硒多糖及对RAW264.7细胞的免疫调节作用研究

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近年来,多糖的硒化修饰被证明是增强多糖免疫调节活性的有效方法。然而,硒含量对硒化衍生物中免疫调节活性的影响报道较少。目前常规硒化方法(硝酸-亚硒酸钠法)所合成硒多糖的硒含量有限,不利于硒多糖构效关系的研究,且环境不友好。因此,开发在温和反应条件下、高硒含量的新型多糖硒化体系尤为重要,对构效关系的相关研究也具有一定的启发性。基于此,本论文以圆头蒿多糖(polysaccharide from Artemisia sphaerocephala,PAS)为原料,酸性离子液体氮甲基吡咯烷酮硫酸氢盐([HNMP]HSO4)为均相催化剂,在较温和条件下高效合成圆头蒿硒多糖(SePAS),并通过体外细胞实验评价了硒含量对免疫活性的影响以及对硒多糖的免疫调节作用机理进行了初步研究,主要内容及结论如下:1.[HNMP]HSO4催化合成SePAS[HNMP]HSO4由于具有强Br?nsted酸性而在硒化反应中显示出良好的催化活性,通过增强H2SeO3的质子化能力,从而合成较高硒含量的SePAS,所合成的最高硒含量为8744μg/g(SePAS3),与未使用[HNMP]HSO4作为催化剂的SePASC(1676μg/g)相比,硒含量提高了5倍。通过FT-IR、XPS和1D/2D NMR对SePAS进行结构表征,证实Se以亚硒酸酯(Se4+)的形式成功引入了PAS的结构中,且发生硒化取代的主要位置在C-6位。在SEC-MALLS分析中,观察到SePAS的MW(0.25-5.86×104 g/mol)发生了显著降解现象,说明[HNMP]HSO4的强酸性可导致SePAS的MW降低。2.SePAS的体外免疫调节作用及对MAPKs和NF-κB信号通路的影响SePAS可显著增强巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用,且高硒含量的硒多糖(SePAS3,8744μg/g)具有更强的免疫应答活性,证明硒含量是增强SePAS体外免疫调节活性的关键因素之一。对SePAS激活RAW264.7细胞免疫调节活性机制的研究发现,SePAS主要通过上调MAPKs和NF-κB信号通路中ERK1/2、JNK1/2、p38和p65的磷酸化来发挥免疫调节活性,从而促进RAW264.7细胞增殖,吞噬并刺激NO和细胞因子(TNF-α,IL-1β和IL-6)的产生。综上所述,本论文以[HNMP]HSO4为催化剂,在较温和条件下合成了高硒含量的SePAS,并比较了SePAS的硒含量对其免疫调节活性的影响,且较为系统地在体外水平研究了其诱导RAW264.7细胞免疫调节活性及其相关机制,为硒含量与免疫调节活性之间的相关性提供了理论依据。
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