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目的1研究气虚血瘀证及气阴两虚证两种证型的IPF患者血中VEGF、PI3K、AKT、HIF-1α、D-D及T细胞亚群含量与证型间的相关性。2研究参七虫草方含药血清对PMVECs的迁移以及对PI3K/AKT/HIF-1α信号通路的影响。方法1临床研究:收集60例IPF患者,辨证为气阴两虚证及气虚血瘀证各30例,健康体检者30例作为正常组,比较分析三组病例血中VEGF、PI3K、AKT、HIF-1α、D-D及T细胞亚群表达水平,进行组间的相关性比较。2体外实验:(1)选择20只SD雄性大鼠,随机分成2组,采用一次性气管内滴注博来霉素造模,28天后无菌取肺组织,分离培养原代肺微血管内皮细胞,空白组用生理盐水代替博来霉素进行假手术。(2)选择40只SD雄性大鼠,随机分成2组,含药血清组每天以参七虫草方灌胃,空白组用等量生理盐水灌胃,每天2次,连续3天,末次灌胃1小时后无菌条件下经腹主动脉取血,分离血清。(3)MTT法检测5%、10%、20%含药血清对肺微血管内皮细胞增殖的影响,选择最佳浓度进行实验。(4)用Transwell法检测肺微血管内皮细胞的迁移能力,Western blot法检测最佳浓度含药血清对肺微血管内皮细胞VEGF、PI3K、AKT、HIF-1α蛋白水平的表达。结果1临床研究1.1与正常组相比较,IPF患者的D-D含量显著升高(P<0.01);气虚血瘀组患者D-D含量比气阴两虚组D-D含量高(P<0.05)。1.2与正常组相比较,IPF两组患者CD3~+T、CD4~+T、CD4~+/CD8~+T表达水平显著下降(P<0.01),IPF两组患者CD8~+T表达水平显著上升(P<0.01)。与气阴两虚组相比较,气虚血瘀组CD3~+T、CD4~+T、CD8~+T、CD4~+/CD8~+T表达水平无差异(P>0.05)。1.3与正常组相比较,IPF患者血清VEGF、PI3K、AKT、HIF-1α含量均显著上升(P<0.01)。气虚血瘀组PI3K含量高于气阴两虚组(P<0.05);气虚血瘀组VEGF、AKT、HIF-1α含量均显著高于气阴两虚组(P<0.01)。2体外细胞实验2.1 MTT检测结果:模型组较空白组细胞活力显著增强(P<0.01)。与模型组相比较,5%含药血清组细胞活力无差异(P>0.05),10%及20%含药血清组细胞活力下降(P<0.05)。与5%含药血清组比较,10%及20%含药血清组细胞活力下降(P<0.05)。10%含药血清组细胞活力低于20%含药血清组(P<0.05)。2.2迁移能力:与空白组比较,模型组迁移细胞数显著增多(P<0.01)。与模型组相比,10%含药血清组、LY294002组及LY294002+10%含药血清组的迁移细胞数显著减少(P<0.01)。与10%含药血清组比较,LY294002组及LY294002+10%含药血清组迁移细胞数显著减少(P<0.01)。LY294002组与LY294002+10%含药血清组无统计学差异(P>0.05)。2.3肺微血管内皮细胞VEGF蛋白的表达:空白组大鼠肺微血管内皮细胞中VEGF有一定量的基础表达,与空白组比较,模型组VEGF表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,10%含药血清组及LY294002+10%含药血清组VEGF表达显著下降(P<0.01);LY294002组无明显差异(P>0.05)。与10%含药血清组相比,LY294002组VEGF表达水平明显上升(P<0.01),LY294002+10%含药血清组VEGF表达水平无差异(P>0.05)。与LY294002组比较,LY294002+10%含药血清组VEGF表达水平显著下降(P<0.01)。2.4肺微血管内皮细胞PI3K蛋白的表达:空白组大鼠肺微血管内皮细胞中PI3K有一定量的基础表达,与空白组比较,模型组PI3K表达升高(P<0.01)。与模型组比较,10%含药血清组、LY294002组及LY294002+10%含药血清组PI3K表达水平均显著下降(P<0.01)。与10%含药血清组相比,LY294002组及LY294002+10%含药血清组PI3K表达水平均下降(P<0.05)。2.5肺微血管内皮细胞AKT蛋白的表达:空白组大鼠肺微血管内皮细胞中AKT有一定量的基础表达,与空白组比较,模型组AKT表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,10%含药血清组、LY294002组及LY294002+10%含药血清组AKT表达均显著下降(P<0.01)。与10%含药血清组相比,LY294002组及LY294002+10%含药血清组AKT表达水平均下降(P<0.05)。2.6肺微血管内皮细胞HIF-1α蛋白的表达:空白组大鼠肺微血管内皮细胞中HIF-1α有一定量的基础表达,与空白组比较,模型组HIF-1α表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,10%含药血清组、LY294002组及LY294002+10%含药血清组HIF-1α表达均显著下降(P<0.01)。与10%含药血清组相比,LY294002组及LY294002+10%含药血清组HIF-1α表达水平均明显下降(P<0.01)。结论1 IPF患者存在高凝状态,气虚血瘀证患者比气阴两虚证患者明显。2 IPF患者机体免疫功能紊乱,气虚血瘀证与气阴两虚证患者之间免疫功能紊乱程度无显著差异。3 IPF患者VEGF、PI3K、AKT、HIF-1α表达水平上升,气虚血瘀证患者比气阴两虚证患者表达水平更高。4 10%参七虫草含药血清对肺微血管内皮细胞的增殖抑制作用最强。5血管新生参与IPF的发病过程,参七虫草方可以通过抑制肺微血管内皮细胞迁移从而抑制肺纤维化的形成。6参七虫草方能够抑制肺微血管内皮细胞VEGF蛋白表达及抑制PI3K/AKT/HIF-1α信号通路,一定程度上干预肺纤维化形成。