目的建立流式细胞术（FC）检测急性髓细胞白血病（AML）微小残留病（MRD）的方法，分析初发AML患者的免疫表型，筛选出白血病相关免疫表型（LAIP），监测MRD的水平，分析MRD与疾病转归和病人生存的关系。并观察LAIP的改变与初发时LAIP阴性患者缓解后的筛查结果，分析LAIP的变化情况。比对分子遗传学结果，探讨FC检测的MRD值在分子遗传学阴性时的阈值；最后分析MRD与携带重现性染色体异常的干组细胞比率，以此探讨MRD与白血病干细胞（LSC）之间的关系。方法2010.10-2010.11我科正常或贫血病人12例，NHL和ALL移植后造血重建病人5例，分别以常见AML-LAIP组合检测，确定空白阈值，并做重复性和灵敏度实验。2010.10-2012.2我科就诊的AML(non-M3)患者81例，分析其免疫表型，筛查LAIP，并在诱导后跟踪监测MRD，分析其与临床转归及其他临床因素的关系;以CD2,CD7,CD56等常见跨系表达和CD15,CD64,CD11c等常见不同步表达的LAIP组合在缓解后持续检测所有样本，分析化疗后LAIP的变化，观察初发时LAIP阴性患者的MRD水平。比对24例携带重现性染色体异常的AML(non-M3)患者遗传学结果与流式检测的MRD水平,作受试者工作特征（ROC）曲线分析求得遗传学转阴的最佳cut-off值。13例携带重现性染色体异常且获得CR的AML(non-M3)病人流式玻片分选CD34+CD38-和CD34+CD38+细胞各5000个，风干后FISH分析染色体异常细胞比率，并求得同一样本的MRD水平与染色体异常的干祖细胞之间的比率关系。结果（1）非AML样本CD34+细胞的不同步表达本底<5×10-4,跨系表达的本底<2×10-4，CD117+细胞与CD15、CD64的不同步表达组合本底〉1×10-3;同一样本多次检测结果的差异在20%以内，AML样本以细胞数10倍比稀释可检测到10-4的白血病细胞。（2）81例初发或复发AML样本中，69例(85.0%)能检出特异性较好的LAIP;26例(32.1%)病人CD34阴性，其中7例(8.6%)CD34和CD117均阴性。在CD34阴性的11例住院治疗病人中，有9例在化疗后依然以CD34+细胞检测MRD，MRD水平与临床或遗传学结果一致。41例AML(non-M3)病人进行了176次MRD检测，其中诱导或巩固第一次CR后MRD≤0.06%的病人一年半的总体生存率为72.8%，诱导或巩固第一次CR后MRD>0.06%的病人一年半的总生存率为27.4%。在CR后复发的22例病人中，MFC检测MRD提前于形态学1～6个月发现复发趋势，其中60%的病人在2～3个月内复发。(3)24例携带重现性遗传学异常的AML病人中，形态学复发的跨系表达的MRD水平为(2.651±3.529)%，CR但遗传学阳性的MRD值为(0.167±0.371)%，遗传学阴性的MRD值为(0.009±0.010)%，不同步表达的MRD为(1.02±1.63)%，(0.242±0.350)%，(0.043±0.034)%（p值均小于0.01）。不同步表达MRD水平在3组间的最佳cut-off值分别为0.326%、0.08%；跨系表达在3组间的最佳cut-off值分别为0.276%，0.023%，以该cut-off值可以检出89.5%的遗传学阳性患者，而假阳性比率仅为7.7%。(4)13例CR且干祖细胞携带低水平重现性染色体异常（FISH阳性细胞比率<5%）的病人，MRD与携带异常染色体的CD34+细胞间比率为57.15（1.24～177.；12例CD34+CD38-细胞携带低水平重现性染色体的病人，MRD与携带异常染色体的CD34+CD38-细胞间比率为353.2(20～1950)；结论（1）本实验室的流式检测AML-MRD方法学可靠，本底在10-3以下，灵敏度在10-3-10-4之间，重复性较好。（2）AML筛检出LAIP比率高，流式检测AML-MRD覆盖面广。且初发时未筛出LAIP的病人，仍有必要进行MRD检测，我们的研究证实在复发过程中该群病人可能有LAIP出现。（3）MRD与病人的预后密切相关，且绝大部分AML患者能提前发现复发趋势。（4）不同类型LAIP组合的MRD水平在分子遗传学阴性和分子遗传学阳性AML患者中有显著差异，且它们的cut-off值能较好地区分这两组患者。（5）在复发趋势初期或干祖细胞遗传学由阴转阳的时间点，MRD与携带重现性染色体异常的CD34+细胞比均数为57.15，MRD与携带重现性染色体异常的CD34+CD38-细胞比均数为353.2；总体符合MRD/LSC在102以上的观点[1]，但个体间差异较大。