论文部分内容阅读
藏药宽筋藤（Tinospora sinensis（Lour.）Merr.）,藏文名勒哲,是防己科青牛胆属植物中华青牛胆的干燥藤茎,是藏药中常用的药材。宽筋藤主要产于我国西藏东南部,海南,云南,广东、广西等地也有分布。宽筋藤具有抗炎、保肝、抗氧化、免疫调节等[1-3]药理作用,主要化学成分有倍半萜类、二萜类、木脂素类、苯丙素类、生物碱类等[1]化合物。从研究文献结果表明,对宽筋藤的研究大多数停留在化学成分的鉴定上,少有对其化学成分进行定量检测,在宽筋藤防治AD的药效物质基础及其作用机制上未见报道。宽筋藤为藏族地区防治衰老的常用药,但其基础研究不足,物质基础不明。本课题组在国家自然科学基金的资助下,将对宽筋藤防治衰老功效机制及其活性成分进行研究。前期实验已证实宽筋藤浸膏以及氯仿提取部分和乙酸乙酯提取部分有明显的防治衰老功效,并分离出氯仿部分活性成分。具体研究情况如下:1.藏药宽筋藤化学成分的研究本论文对藏药宽筋藤乙酸乙酯萃取部位的浸膏,通过硅胶柱层析、ODS柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、制备型HPLC等方法进行系统分离纯化,并利用MS、UV、1H-NMR、13C-NMR等光谱技术并结合文献进行分析,共得到10个化合物,分别为香草酸（1）,香草醛（2）,对羟基苯甲酸（3）,3-hydroxy-1-（4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl）propan-1-one（4）,丁香酸（5）,胡萝卜苷（6）,β-谷甾醇（7）,5-羟甲基糠醛（8）,l-（2-formyl-l-pyrrolyl）butanoic acid（9）,5-Ethoxymethyl-1-[3’-（N-methyl-hydrazino）-propyl]-1H-pyrrole-2-carbaldehyde（10）。其中化合物10为新化合物,化合物4、5、8、9是首次从宽筋藤中分离得到。2.基于UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS技术对藏药宽筋藤乙酸乙酯部位化学成分的分析与鉴定本论文对藏药宽筋藤乙酸乙酯萃取部位的浸膏,通过硅胶柱层析初步分离得到23段馏分,运用UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS技术分析宽筋藤乙酸乙酯部位化学成分,根据其极性以及在正负离子模式下的分离情况,最终确定选取其中的12段进行分析,共鉴定出492个化合物。鉴定出的化学成分有杂环化合物:86;生物碱:146;醌类化合物:2;苷类化合物:8;黄酮类化合物:2;糖类化合物:8;甾体类化合物:6;萜类化合物:1;有机酸:111;其他化合物:122。其中生物碱类化合物包含酰胺类生物碱:79;吡咯烷类生物碱:7;有机胺类生物碱:18;咪唑类生物碱:14;胍基类生物碱:10;哌啶类生物碱:4;嘌呤类生物碱:9;吲哚类生物碱:4;嘧啶类生物碱:1。3.宽筋藤有效成分的含量测定本课题组前期采用MTT法检测宽筋藤单体化合物对Aβ2535诱导的PC12细胞AD损伤模型实验,发现紫丁香苷对Aβ2535所致的PC12细胞AD损伤模型的存活率有明显改善作用。因此本文建立宽筋藤中紫丁香苷的含量测定方法,为客观评价宽筋藤药材质量奠定实验基础。采用Waters Symmetry C18（4.6mm×250 mm,5μm）色谱柱,以乙腈（A）-水（B）为流动相,梯度洗脱（0-8min,5%A-10%A;8-9min,10%A-11%A;9-20min,11%A-11%A）,流速为1.0mL/min,进样量为10μL,检测波长265nm,柱温为25℃。用上述建立的色谱条件对8批不同地区与不同时间采收的宽筋藤药材中紫丁香苷的含量测定。结果显示:该方法操作简单,稳定可靠,为宽筋藤质量控制的研究提供了重要的参考价值。