目的：观察阿胶强骨口服液对去卵巢大鼠骨质疏松的影响及机制，并探讨阿胶强骨口服液对绝经后骨质疏松的治疗作用。方法：（1）六月龄雌性SD大鼠16只，适应性饲养一周后，随机分为二组：假手术组和去势组，每组8只。3个月后取材检测：两侧股骨，常规HE染色，光镜下观察骨组织结构；使用双能X线骨密度仪测量大鼠股骨头及粗隆部BMD；生物力学测定仪上测定最大载荷（ML）和最大压应变（MS）。（2）6月龄SD大鼠36只，随机分为A组（假手术组），B组（卵巢切除+生理盐水组），C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组），每组12只。6个月后取材检测。采用ELISA法对去势大鼠血清25-OH-VD₃和1，25-（OH）₂-VD₃进行研究，用荧光定量PCR对肾脏VDR基因进行定量分析。（3）6月龄SD大鼠36只，随机分为A组（假手术组），B组（卵巢切除+生理盐水组），C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组），每组12只。6个月后取材检测。采用荧光定量PCR对I型胶原基因进行定量分析，采用免疫印迹法对I型胶原蛋白进行分析。（4）六月龄雌性SD大鼠16只，其中12只用于灌胃制备含药血清和对照血清，4只用于提取细胞。将细胞分为两组，即含药血清组（M组）和对照血清组（C组）。M组的细胞用含药血清培养基培养，C组的细胞用对照血清培养基培养，两组中均加入25ng／ul的M-CSF和RANKL各1ul。分别取干预一周的两组细胞进行TRAP染色。采用噻唑盐（MTT）比色法测增殖情况。通过Annexin V联合PI试剂盒采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）造模情况：1．假手术组大鼠股骨骨小梁丰富、连续、致密；去势组大鼠骨小梁排列稀疏、部分断裂、骨小梁平均宽度变小、骨小梁间距增大。平均骨小梁宽度（μm）：假手术组为71.23±10.62，去势组为52.65±12.17，统计学有显著性差异（p＜0.01）；平均骨小梁间距（μm）：假手术组为83.68±3.69，去势组为105.32±3.55，统计学有显著性差异（p＜0.01）；2．假手术组和去势组大鼠股骨头生物力学结果：最大压应力（N）：假手术组为345.87±32.16，去势组为266.13±30.05，统计学有显著性差异（p＜0.01）；最大载荷（N／mm2）：假手术组为39.13±4.28，去势组为32.39±4.37，统计学有显著性差异（p＜0.01）；3．股骨头骨密度（gms／cm2）：假手术组为0.316±0.015，去势组为0.281±0.017，统计学有显著性差异（p＜0.01）。（2）C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组）血液中25-羟基维他命D₃浓度和1，25-羟基维他命D₃浓度与B组（卵巢切除+生理盐水组）比较明显增高，其中对25-羟基维他命D₃浓度增高尤为明显，已接近A组（假手术组），p=0.002（p＜0.01），差异有明显的统计学意义。荧光定量PCR（FQ-PCR）结果B组与C组相比，p=0.004（p＜0.01），说明扩增效率的差异有明显的统计学意义。（3）C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组）I型胶原蛋白与B组（卵巢切除+生理盐水组）比较明显增高，已接近A组（假手术组），p=0.002（p＜0.01），差异有明显的统计学意义。I型胶原基因荧光定量PCR（FQ-PCR）结果B组与C组相比，p=0.004（p＜0.01），说明扩增效率的差异有明显的统计学意义。（4）1．破骨细胞形态学观察：破骨细胞胞浆饱满，内含许多空泡结构，核大呈圆形，核仁清晰。可见少量融合细胞，含有几个胞核，胞体大，胞浆丰富；2．TRAP染色结果显示破骨细胞胞浆阳性，呈酒红色，核呈阴性；3．阿胶强骨口服液对破骨细胞增殖率的影响：OD值（490nm）值分别为0.1825±0.03641（M组）和0.1819±0.03532（C组），统计学上无显著性差异（p＞0.05）；4．阿胶强骨口服液对破骨细胞凋亡率的影响：凋亡率分别为89.51±1.62％（M组）和63.79±0.87％（C组），统计学上有显著性差异（p＜0.01）。结论：（1）实验SD大鼠，在摘除双侧卵巢3月后成功复制出了绝经后骨质疏松症模型。（2）阿胶强骨口服液可以增加去势大鼠血液中25-OH-VD3、1，25-（OH）2-VD3的浓度，同时上调骨骼中VDR的表达水平。（3）阿胶强骨口服液可以上调骨组织I型胶原mRNA的表达水平，同时显著提高I型胶原蛋白表达含量，这是阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的机制之一。（4）成功使用RANKL和M-CSF体外诱导骨髓间充质干细胞成为破骨细胞，阿胶强骨口服液血清组与对照组对破骨细胞增殖率无显著性差异，但是阿胶强骨口服液血清组可以增加破骨细胞凋亡率。这是阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的机制之一。实验一骨质疏松动物模型的建立目的：观察去势组大鼠和假手术组大鼠骨组织结构、BMD、生物力学之间的差异，从而构建出符合本实验要求的骨质疏松动物模型。方法：六月龄雌性SD大鼠16只，适应性饲养一周后，随机分为二组：假手术组和去势组，每组8只。均以2％戊巴比妥钠（40mg／kg）行腹腔内麻醉，去势组结扎并完整摘除双侧卵巢，假手术组取出等量脂肪组织，3个月后取材检测：两侧股骨，常规HE染色，光镜下观察骨组织结构；使用双能X线骨密度仪测量大鼠股骨头及粗隆部BMD；生物力学测定仪上测定最大载荷（ML）和最大压应变（MS）。结果：1．假手术组大鼠股骨骨小梁丰富、连续、致密；去势组大鼠骨小梁排列稀疏、部分断裂、骨小梁平均宽度变小、骨小梁间距增大。平均骨小梁宽度（μm）：假手术组为71.23±10.62，去势组为52.65±12.17，统计学有显著性差异（p＜0.01）；平均骨小梁间距（μm）：假手术组为83.68±3.69，去势组为105.32±3.55，统计学有显著性差异（p＜0.01）；2．假手术组和去势组大鼠股骨头生物力学结果：最大压应力（N）：假手术组为345.87±32.16，去势组为266.13±30.05，统计学有显著性差异（p＜0.01）；最大载荷（N／mm2）：假手术组为39.13±4.28，去势组为32.39±4.37，统计学有显著性差异（p＜0.01）；3．股骨头骨密度（gms／cm2）：假手术组为0.316±0.015，去势组为0.281±0.017，统计学有显著性差异（p＜0.01）。结论：假手术组和去势组大鼠摘除双侧卵巢后，骨组织结构、BMD、生物力学之间有显著差异，从而成功构建出了符合本实验要求的骨质疏松动物模型。实验二阿胶强骨口服液对去卵巢大鼠25-OH-VD3、1，25-（OH）2-VD3及VDRmRNA的影响目的：研究阿胶强骨口服液（donkey-hide glue reinforcing bone oral solution，DGRBOS）对SD大鼠血液25-羟基维生素D₃（25-OH-VD₃）、1，25-羟基维生素D₃（1，25-（OH）₂-VD₃）和肾脏VDR基因表达的影响，探讨DGRBOS治疗骨质疏松的疗效机制。方法：6月龄SD大鼠36只，随机分为A组（假手术组），B组（卵巢切除+生理盐水组），C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组），每组12只。6个月后取材检测。采用ELISA法对去势大鼠血清25-OH-VD₃和1，25-（OH）₂-VD₃进行研究，用荧光定量PCR对肾脏VDR基因进行定量分析。结果：C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组）血液中25-羟基维他命D₃浓度和1，25-羟基维他命D₃浓度与B组（卵巢切除+生理盐水组）比较明显增高，其中对25-羟基维他命D₃浓度增高尤为明显，已接近A组（假手术组），p=0.002（p＜0.01），差异有明显的统计学意义。荧光定量PCR（FQ-PCR）结果B组与C组相比，p=0.004（p＜0.01），说明扩增效率的差异有明显的统计学意义。结论：阿胶强骨口服液可以增加去势大鼠血液中25-OH-VD₃、1，25-（OH）2-VD₃的浓度，同时上调肾脏中VDR的表达水平，这是阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的机制之一。实验三阿胶强骨口服液对去卵巢大鼠Ⅰ型胶原基因和蛋白表达的影响目的：研究阿胶强骨口服液（donkey-hide glue reinforcing bone oral solution，DGRBOS）对SD大鼠I型胶原基因和蛋白表达的影响，探讨DGRBOS治疗骨质疏松的疗效机制。方法：6月龄SD大鼠36只，随机分为A组（假手术组），B组（卵巢切除+生理盐水组），C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组），每组12只。6个月后取材检测。采用荧光定量PCR对I型胶原基因进行定量分析，采用免疫印迹法对I型胶原蛋白进行分析。结果：C组（卵巢切除+阿胶强骨口服液组）I型胶原蛋白与B组（卵巢切除+生理盐水组）比较明显增高，已接近A组（假手术组），p=0.002（p＜0.01），差异有明显的统计学意义。I型胶原基因荧光定量PCR（FQ-PCR）结果B组与C组相比，p=0.004（p＜0.01），说明扩增效率的差异有明显的统计学意义。结论：阿胶强骨口服液可以上调骨组织I型胶原mRNA的表达水平，同时显著提高I型胶原蛋白表达含量，这是阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的机制之一。实验四阿胶强骨口服液对体外诱导培养的破骨细胞的影响目的：将阿胶强骨口服液含药血清加入破骨细胞培养体系，研究阿胶强骨口服液对破骨细胞增殖和凋亡的影响，探讨DGRBOS治疗骨质疏松的疗效机制。方法：六月龄雌性SD大鼠16只，其中12只用于灌胃制备含药血清和对照血清，4只用于提取细胞。将细胞分为两组，即含药血清组（M组）和对照血清组（C组）。M组的细胞用含药血清培养基培养，C组的细胞用对照血清培养基培养，两组中均加入25ng／ul的M-CSF和RANKL各1ul。分别取干预一周的两组细胞进行TRAP染色。采用噻唑盐（MTT）比色法测增殖情况。通过Annexin V联合PI试剂盒采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：1．破骨细胞形态学观察：破骨细胞胞浆饱满，内含许多空泡结构，核大呈圆形，核仁清晰。可见少量融合细胞，含有几个胞核，胞体大，胞浆丰富；2．TRAP染色结果显示破骨细胞胞浆阳性，呈酒红色，核呈阴性；3．阿胶强骨口服液对破骨细胞增殖率的影响：OD值（490nm）值分别为0.1825±0.03641（M组）和0.1819±0.03532（C组），统计学上无显著性差异（p＞0.05）；4．阿胶强骨口服液对破骨细胞凋亡率的影响：凋亡率分别为89.51±1.62％（M组）和63.79±0.87％（C组），统计学上有显著性差异（p＜0.01）。结论：成功使用RANKL和M-CSF体外诱导骨髓间充质干细胞成为破骨细胞，阿胶强骨口服液血清组与对照组对破骨细胞增殖率无显著性差异，但是阿胶强骨口服液血清组可以增加破骨细胞凋亡率。这是阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的机制之一。