论文部分内容阅读
目的检测Tim-3及Galectin-9在肝癌中的表达，探讨Tim-3在肝癌中的表达与临床预后之间的关系。方法收集38例临床新鲜肝癌组织标本，其中包括30例HBV+，8例HBV-，采用流式细胞检测T细胞上Tim-3及Galectin-9的表达，免疫组化化学染色法检测组织中Tim-3的表达，实时定量PCR检测其mRNA的表达。同时收集了2007-2010年间99例HBV+的肝癌组织标本，比较Tim-3的表达与临床预后的关系。结果流式细胞检测发现Galectin-9在肝癌微环境中主要表达在Kuffer细胞上，阳性率为40%，而对于HBV+及HBV-的肝癌患者中Galectin-9在Kuffer细胞上的表达率有显著差异。Tim-3在肝癌组织中的表达高于癌旁组织，且在HBV+肝癌患者中的表达高于HBV-患者，同时在CD4+T细胞中的表达稍高于CD8+T细胞，相应的Tim-3的mRNA的相对表达量呈同步改变。生存分析发现，Tim-3表达率较高的患者3年术后生存率明显短于表达率较低的患者。结论Tim-3以及Galectin-9在肿瘤组织中明显高表达，且Tim-3的表达与有无HBV感染有关，Tim-3的高表达提示较差的预后，因此，Tim-3可以作为一个评估肝癌预后的指标。目的研究Tim-3/Galectin-9通路激活以及被阻断后肝癌微环境中CD4+T细胞功能改变。方法提取人新鲜肝癌组织中侵润的淋巴细胞，用流式细胞技术分析免疫细胞的表型及细胞因子，同时分选Tim-3+CD4+T细胞与Kuffer细胞共培养，利用Tim-3阻断性抗体抑制Tim-3/Galectin-9通路的激活，再用流式细胞技术分析Tim-3+CD4+T细胞所表达的细胞因子的改变，同时用Elispot检测其IFN-γ的表达变化，并且用CSFE标记实验鼠与对照组的Tim-3+CD4+T细胞，观察其增殖改变，最后用实时定量PCR检测细胞周期调控基因P16、P21、CDK7、CDC2等表达，判断其细胞周期改变。结果肝癌患者微环境中的Tim-3+CD4+T细胞的功能呈受抑制状态，其分泌的IFN-γ、IL-2明显少于Tim-3-CD4+T细胞，且反应其细胞活性的标志HLA-DR、Ki-67也明显减少，但使用Tim-3阻断性抗体后，这些细胞因子及表面标志的表达水平上调，提示了这群细胞的功能有所恢复，同时T细胞增值实验结果表明Tim-3+CD4+T细胞的增殖能力也有所恢复。细胞周期调控基因的表达检测显示G1/S期的相关调控基因表达增高，而G2/M期的相关调控基因表达减低，其结果页证实Tim-3+CD4+T细胞的细胞周期则阻滞于G1/S期。结论Tim-3/Galectin-9通路激活可以引起CD4+T细胞的失能，而阻断该通路可以恢复CD4+T细胞部分功能，而这可能与其引起细胞周期阻滞有关。