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背景和目的 肿瘤的增殖和转移是肿瘤细胞不断分裂生长，然后从原发灶游离出来，通过体液介导，在离原发灶远处固定后产生浸润、转移的过程，是一个极其复杂的多基因调控和多步骤发展过程。KAI1／CD82基因是四穿膜超家族(transmemberane 4 superfamily，TM4SF)成员之一，CD44是广泛分布于细胞表面的跨膜糖蛋白，Fas是细胞膜表面蛋白的TNF／NGF-R家族的成员，为Ⅰ型蛋白。以上基因在肿瘤的增殖和转移过程中均起着重要作用。资料表明，肺癌发病率逐年上升，已成为目前人类癌症死亡的主要原因之一。肺癌治愈率低的主要原因是大多数患者确诊时已属于晚期，即已发生了转移，失去了治疗的最佳时期。进行肺癌转移机理的研究，是目前的重要课题，与其它肿瘤一样，CD82、CD44和Fas基因对肺癌的增殖与转移有着重要的调控作用。然而目前关于CD82、CD44和Fas基因与肺癌转移关系的研究报道不多，且意见不一。DNA含量测定是通过反映肿瘤细胞核酸代谢状况了解其生长增殖活性的一项新方法，能作为临床判断肿瘤的演进状态和恶性程度提供客观的依据。本试验应用流式细胞双荧光标记法对45例非小细胞肺癌患者手术新鲜标本中CD82、CD44和Fas蛋白表达及DNA含量(DNA index，DI)进行检测，并分析它们之间的相关性，探讨CD82、CD44、Fas基因和DNA含量在肺癌转移中的调控机制以及它们与肺癌分化程度、TNM分期等临床生物学行为之间的关系，以期为肺癌的早期诊断、判断预后以及提高治愈率提供新的方法。 浙江大学硕士学位论文 材料与方法 45例肺癌患者手术新鲜标本来自浙江大学医学院第一附属医院、第二附属医院及解放军117医院胸外科2002年12月一2004年2月间收治的肺癌患者。其中，男性33例，女性12例。年龄范围35一78岁，平均年龄(52土1 .5)岁。所有患者术前均未接受放疗和化疗，术后病理诊断均证实为肺癌。组织学分类及分级:鳞癌23例，腺癌17例，大细胞未分化癌5例，高分化10例，中分化17例，低分化18例。根据1997年UICC分期:I期11例，11期20例，111期12例，IV期2例。有淋巴结转移者25例，无淋巴结转移者20例。取30例远离癌旁组织scm以上的正常肺组织作为正常对照组，取同期手术的肺部良性病变(肺结核和炎性假瘤)20例作为良性对照组。 用「ACSort型流式细胞仪(美国BD公司生产)对45例肺癌患者手术新鲜标本中CO82、CO44和「as蛋白表达及ONA含量进行检测，并与正常对照组(n二30)和肺部良性病变组(n二20)进行对比研究。上机前先以标准荧光微球调整仪器，使变异系数在5%以内。氨离子激发光波长为488nm，散射光带通滤片F!TC为(530士10)nm，p〔为(575士10)nm，收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在计算机上用软件cel!Qwe st p Iot(美国BO公司产)分析点图及组方图，打印结果。以荧光强度的几何均数表示CD82、CD44和 FaS表达水平。 用SpSS 1 0.0 for wi ndows统计软件包在计算机上处理分析。统计方法包括t检验、方差分析和直线相关分析。 结果一、肺癌组、 肺癌组良性组及对照组CD82、CD44和Fas表达及DNA含量的比较CD82和F。S表达低于正常对照组和肺部良性组(F二1 0.37，「二12.13，只0.01)，Co44表达和DI值高于正常对照组和肺部良性组(F二21 .66，F二34.45，只0.01)，正常对照组中CD82、CD44和Fas表达及DI值与良性病变组相比均无显著性差异(乃0.05)。二、CD82、Co44和「as表达及DNA含量与肺癌临床病理特征的关系 I+11期肺癌组织中CD82和Fas的表达高于111+W期(t二2.18. 浙江大学硕士学位论文只0.05:t二3.41，只0.01)，I+11期CD44表达水平和DNA含量低于111+IV期 (t二4.84，t二5.02，只0.01);中高分化与低分化之间CD82、CD44、Fas表达和DNA含量有显著性差异(t值为4.13:6.15:4.02:4.35，只0.01)。肺癌伴淋巴结转移者CO82表达水平明显低干不伴淋巴结转移者(t=4 .21，只0.01)，CD44表达高于不伴淋巴结转移者(t二7.11，只0.01)。Fas表达和DNA含量与有无淋巴结转移无明显关系(t二1.53，t二1.37，乃0.05)。CD82、CD44、Fas表达和DNA含量与患者的年龄、性别、肿瘤大小和病理类型均无明显关系 (乃0 .05)。三、CD82、CD44和Fas表达与肺癌细胞DNA含量的相关性研究 45例肺癌中，7例为二倍体，38例为异倍体。20例癌旁组织和肺部良性病变组均为二倍体。随着肺癌细胞Dl值不断升高，CO82和Fas表达逐渐降低，二者与DI值均呈负相关(:二一0.67，r二一0.88，只0.01);CO44表达则逐渐升高，呈正相关(r二0.54，只0.01)。CD82蛋白和Fas蛋白的表达水平与CD44蛋白的表达水平均呈负相关(r二一0.95，r二一0.65，只0.01)。 结论1、CD82、CO44、Fas表达及。NA含量在肺癌发生、发展和转移过程中起着共同 调节作用，联合检测这些指标对预测肿瘤的生长和转移潜能具有一定的指 导意义。2、ONA含量是影响肿瘤复杂