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目的:女性生殖系统的恶性肿瘤之一子宫内膜癌发病率逐年上升,现已经成为发达国家极其常见的女性恶性肿瘤。子宫内膜癌的治疗方法现如今有手术治疗,放化疗以及激素治疗等。但是,对于中晚期的子宫内膜癌患者,因为转移和复发的原因,失去手术机会,治疗失败几率仍然很高。随着子宫内膜癌分子机制的阐明,越来越多的分子靶向药物正在进行临床应用测试,有些已显示出有效效果,其中EFGFR2以及mTOR信号通路抑制剂的临床应用已经获取了一定的成功。因此,子宫内膜癌发展的潜在机制,特别是那些参与肿瘤转移的机制,已成为子宫内膜癌分子靶向治疗发展的基础,对于子宫内膜癌的治疗成为重中之重。高迁移率族蛋白A(high mobility group protein A,HMGA)家族是一类以AT-钩结构域和酸性末端为特征的小分子非组蛋白染色体蛋白,包括HMGA1a、HMGA1b、HMGA1c和HMGA2四个成员,其中HMGA2的编码基因位于许多肿瘤细胞染色体断裂点的簇集区,其异常表达与肿瘤有关,生物学行为类似癌基因。高迁移率组蛋白A2(HMGA2)已经成为候选生物标志物,值得注意的是,高迁移率组AT-hook 2(HMGA2)已被认为是肿瘤转移的驱动因素。MicroRNAs(miRNAs)称为微小RNA。它是一类小的非编码RNA,核苷酸在长度约19-25,具有调节功能,它主要通过完全或不完全与靶基因的mRNA的3’-UTR进行配对,达到降解靶基因的mRNA的目的,或者达到抑制靶基因mRNA的翻译,由此影响细胞的增殖或是凋亡能力,参与细胞的各种生理和病理过程,miRNAs是HMGA2强大的转录后调节剂。本研究旨在研究非编码RNA调控子宫内膜癌细胞系的恶性生物学行为,进一步深入分析可能的分子机制:miRNA-302/367通过靶向HMGA2调控子宫内膜癌细胞系的恶性生物学行为。方法:使用Real-time-PCR检测在人子宫内膜癌组织中HMGA2的表达水平,并分析HMGA2表达量与患有子宫内膜癌疾病的患者临床病理参数的关系。Western blotting和免疫组织化学方法检测HMGA2在人子宫内膜癌组织中的表达水平。使用Real-time-PCR检测miR-302a-5p和miR-367-3p在人子宫内膜癌组织中的表达水平,并分析其表达与临床病理参数的关系。利用生物信息学预测软件对HMGA2 mRNA的miR-302a-5p和miR-367-3p的结合位点进行鉴定,构建HMGA2野生型及突变型荧光素酶载体,将其与miR-302a-5p和miR-367-3p的mimics在293T细胞中共同转染,通过荧光素酶实验检测荧光值。HMGA2与miR-302a-5p和miR-367-3p的结合作用及结合位点。构建HMGA2过表达及敲低的子宫内膜癌Ishikawa及HEC-1A子宫内膜癌细胞系,利用Real-time PCR验证HMGA2载体的转染效率。利用CCK-8以及EdU实验对HMGA2过表达及敲低后的子宫内膜癌细胞的增殖能力进行检测,利用划痕实验对HMGA2过表达及敲低后的子宫内膜癌细胞的迁移能力进行检测。利用Transwell实验对HMGA2过表达及敲低后的子宫内膜癌细胞的侵袭能力进行检测。利用流式细胞仪对HMGA2过表达及敲低后的子宫内膜癌细胞的凋亡以及周期能力进行检测。构建miR-302a-5p/miR-367-3p过表达及敲低的子宫内膜癌Ishikawa及HEC-1A子宫内膜癌细胞系,CCK-8实验检测两种细胞中miR-302a-5p/miR-367-3p过表达及敲低后细胞的增殖能力的变化;EdU实验同样检测对miR-302a-5p/miR-367-3p过表达水平以及干预后Ishikawa及HEC-1A细胞的增殖能力变化;划痕实验检测对miR-302a-5p/miR-367-3p过表达水平以及干预处理后细胞迁移能力改变;Transwell实验检测对miR-302a-5p/miR-367-3p过表达水平以及干预后细胞侵袭能力改变。利用流式细胞仪对miR-302a-5p/miR-367-3p过表达及敲低后的子宫内膜癌细胞的凋亡以及周期能力进行检测。Western Blot方法检测N-cadherin,E-cadherin蛋白的表达变化。并在裸鼠移植瘤实验检测miR-302a-5p/miR-367-3p和HMGA2对裸鼠移植瘤的生长的影响,通过体外和体内测定来研究miR-302a-5p和miR-367-3p通过靶向调控HMGA2对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的影响。结果:在本研究中,HMGA2在子宫内膜癌组织中高表达,且与子宫内膜癌的不良临床结果相关。使用生物信息学预测软件鉴定HMGA2与miR-302a-5p/miR-367-3p的结合位点,并通过荧光素酶测定进行验证。在子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A中,miR-302a-5p/367-3p的过表达显着抑制HMGA2的表达。在子宫内膜癌组织中,我们发现miR-302a-5p和miR-367-3p显着低表达,且与HMGA2表达呈负相关。miR-302a-5p和miR-367-3p表达水平与FIGO分期和淋巴结转移密切相关。此外,CCK-8,EdU显示干扰HMGA2表达后细胞增殖能力被抑制,划痕实验结果表明干扰HMGA2表达后可以抑制细胞的愈合能力,Transwell实验结果表明干扰HMGA2后抑制细胞的侵袭能力,流式实验显示干扰HMGA2表达后细胞整体凋亡率(早期凋亡+晚期凋亡)升高,细胞停止于G0/G1期。CCK-8,EdU显示过表达miR-302a-5p和miR-367-3p后细胞增殖能力被抑制,划痕愈合实验显示过表达miR-302a-5p和miR-367-3p后细胞愈合能力降低,Transwell结果显示过表达miR-302a-5p和miR-367-3p后细胞侵袭能力降低,流式实验显示过表达miR-302a-5p和miR-367-3p表达后细胞整体凋亡率(早期凋亡+晚期凋亡)升高,细胞周期停止于G0/G1期。恢复实验证实miR-302a-5p/367-3p通过抑制HMGA2表达来抑制子宫内膜癌细胞的恶性行为。裸鼠实验显示沉默HMGA2或过表达miR-302a-5p/367-3p均可抑制裸鼠移植瘤的生长,沉默HMGA2联合过表达miR-302a-5p/367-3p可最大程度抑制裸鼠移植瘤的生长。结论:1.HMGA2在子宫内膜癌组织中高表达,miR-302a-5p/367-3p在子宫内膜癌组织中低表达,miR-302a-5p和miR-367-3p表达水平与FIGO分期和淋巴结转移密切相关。HMGA2和miR-302a-5p/367-3p在子宫内膜癌组织中呈负相关性。2.HMGA2 靶向结合 miR-302a-5p/367-3p。3.miR-302a-5p/367-3p可通过负性调控HMGA2抑制子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为。