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第一部分黄芩素抑制铜绿假单胞菌运动能力的体外研究目的研究黄芩素对铜绿假单胞菌泳动、丛集运动和颤搐运动的影响。方法实验可分为空白对照组、不同亚抑菌浓度黄芩素组、克拉霉素阳性对照组;采用两倍稀释法测定药物最低抑菌浓度(MIC);根据不同的配方制成不同培养基,将实验菌株隔夜培养,用无菌牙签挑取单个菌落接种于上述培养皿中,观察以细菌接种点为中心的运动形状及轨迹,通过测量运动环来评估细菌的运动能力。结果不同亚抑菌浓度黄芩素组形成的泳动同心圆区域直径与空白组比较无统计学差异(P>0. 05);黄芩素各亚抑菌浓度组、空白对照组形成的同心圆区域直径大于克拉霉素组(P<0. 05),丛集运动能力检测,各组均以接种点为中心,但空白对照组周边形成齿轮样放状迹,128 μ g/ml,64 μ g/ml的黄芩素组及克拉霉素组,其运动区呈以接种点为中心的圆状区域,周边光滑,无伪足样放射,且区域直径小于空白对照组(P<0. 05),32 μ g/ml的黄芩素组,周边可见较稀疏、细长的足样放射,但区域直径和空白对照组无统计学差异(P>0. 05),各亚抑菌浓度的黄芩素组区域直径大于克拉霉素组(P<0. 05);颤搐运动能力检测,各组均以接种点为中心形成同心圆样区域,黄芩素各亚抑菌浓度组、克拉霉素组同心圆区域直径均小于空白对照组(P<0. 05),克拉霉素组区域直径与128μ g/ml,64μ g/ml的黄芩素组比较无统计学差异(P>0.05),但小于32μg/ml的黄芩素组(P<0.05)。结论各亚抑菌浓度的黄芩素虽未显示出抑制铜绿假单胞菌泳动的效应,但均可明显抑制铜绿假单胞菌的丛集运动和颤搐运动,128 μg/ml、64μ g/ml的黄芩素与克拉霉素抑制铜绿假单胞菌颤搐运动能力相当。第二部分黄芩素联合头孢哌酮/舒巴坦对铜绿假单胞菌生物被膜增效作用的体外研究目的主要研究黄芩素对铜绿假单胞菌生物被膜的破坏作用以及与头孢哌酮/舒巴坦联合杀菌效果方法选取铜绿假单胞野生株PA01建立体外生物被膜模型,二倍稀释法测定黄芩素以及头孢哌酮/舒巴坦的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);连续活菌稀释法测定生物被膜内活菌计数;荧光显微镜观察生物被膜表面形态。结果生物被膜形成加入药物24h后,活菌计数结果显示,无论药物单独作用还是联合应用时与空白对照组相比,活菌计数均明显减少(P＜0.01);黄芩素联合头孢哌酮/舒巴坦组与黄芩素组、头孢哌酮/舒巴坦组比较,活菌计数均明显减少(P＜0.01);黄芩素组与头孢哌酮/舒巴坦组比较,活菌计数无明显减少(P＞0.05)。激光共聚焦显微镜观察发现,黄芩素组较空白对照组所形成的生物被膜有所减少且分布较稀薄,且以活菌为主(绿色信号);头孢哌酮/舒巴坦组较空白对照组分布稀薄,活菌为主,有少量死菌(红色信号);黄芩素+头孢哌酮/舒巴坦组可观察到少量细菌生物被膜,且主要是分布散落的细菌,多以死菌为主。结论黄芩素能破坏铜绿假单胞菌已形成的生物被膜,与头孢哌酮/舒巴坦联合应用时能显著增强其对铜绿假单胞菌生物被膜的杀菌作用。