目的建立PCR-反向斑点杂交检测SLC25A13基因突变Ⅰ、突变Ⅲ和突变Χ技术。方法1.设计与合成SLC25A13基因突变Ⅰ、Ⅲ、Χ寡核苷酸探針。2.选择不同浓度探针、不同杂交温度和不同洗膜温度进行杂交检测,探索最佳杂交条件。3.应用已建立的反向斑点杂交技术检测已知基因突变和未知基因突变患儿,并进行测序分析,观察两种检测方法的结果符合率。结果1.0.45μm孔径尼龙膜、15-20pmol/μL探针浓度、42.5℃杂交温度、42.5℃洗膜温度杂交结果最理想。2.100例已知突变组患儿用PCR-反向斑点杂交技术检出突变Ⅰ纯合子17例、Ⅰ/Ⅲ和Ⅲ/Ⅹ复合杂合子各1例,Ⅰ/Ⅹ复合杂合子2例,单条等位基因携带突变Ⅰ44例,单条等位基因携带突变Ⅲ和单条等位基因携带突变Ⅹ1例1人,与PCR—DNA直接测序法检出结果一致,符合率100%。3.50例未知突变组中,用PCR-反向斑点杂交技术共检出突变Ⅰ纯合子8人,单条等位基因携带突变Ⅰ7人,单条等位基因携带突变Ⅲ和单条等位基因携带突变Ⅹ各1人,经PCR-DNA直接测序法检测,结果一致,符合率100%。结论本研究建立的PCR-反向斑点杂交检测SLC25A13基因突变Ⅰ、Ⅲ、Χ技术,结果准确,方法简便、快速,仅需1天时间。