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根据氨基酸序列和受体的差异,干扰素(IFN)分为I型、II型和新发现并命名归类的III型。IFN-λ3(又名IL-28B)是2003年发现的III型IFN-λ家族成员中的一员。跟其一起发现还有结构类似的IFN-λ1(又名IL-29)、IFN-λ2(又名IL-28A)。IFN-λ3基因结构与IL-10类似,氨基酸水平却与IFN接近。小鼠的IFN-λ家族仅发现2个成员,即IFN-λ2和IFN-λ3。研究发现mIFN-λ3 mRNA表达于小鼠血液细胞、肺、胰腺、胎盘、脑等多种组织中,其表达受病毒感染的外周血单个核细胞、树突状细胞和肿瘤细胞等的刺激诱导。自1957年IFN被发现以来,有关IFN的研究就不断深入。I型IFN已被认可临床应用于多种肿瘤和病毒性疾病的治疗,但其疗效往往很有限而且对于不同疾病差异较大,且常出现疲劳、发热等不良反应。新发现的IFN-λs的功能与I型IFN相似,但其受体跟I型IFN的受体却有所不同,极有可能替代I型IFN应用于临床治疗。IFN-λs的受体在人体中的分布不同于I型IFN,使得其能选择性作用于不同靶细胞、靶基因并发挥其独特生物学活性。本研究用分子生物学技术构建小鼠IFN-λ3的原核及真核表达载体、进行原核和真核表达系统表达mIFN-λ3蛋白以及对其生物学功能的初步研究,为进一步研究其功能奠定了基础。本文主要研究内容如下:一、根据GenBank中小鼠IFN-λ3基因序列(AY869696)设计特异性引物,用聚合酶链式反应(PCR)技术,克隆出mIFN-λ3基因的全长编码区。将其克隆入pcDNA3.1(+)载体,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mIFN-λ3。二、根据小鼠IFN-λ3基因序列设计出一对特异性引物,用PCR技术,从购置的表达克隆质粒(EX-Mm18539-M03)中克隆出mIFN-λ3成熟蛋白编码区,将其克隆入载体pET-44(+),构建原核表达载体pET-44-mIFN-λ3,经测序鉴定其编码基因与GenBank中小鼠IFN-λ3基因序列(AY869696)一致。将该表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达菌株,然后在25°C用IPTG诱导,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。三、利用已构建好的真核表达重组质粒pcDNA3.1-mIFN-λ3在293细胞中表达。使用MTT法检测表达产生的mIFN-λ3目的蛋白对肿瘤细胞A549和SW620细胞的生长影响,并通过在A549、SW620细胞中诱导MxA抗病毒蛋白的产生研究mIFN-λ3的抗病毒机制。结果发现mIFN-λ3具有抗肿瘤细胞增殖效应,且其抗病毒分子机制可能与诱导肿瘤细胞产生MxA抗病毒蛋白有关。总之,本实验探讨了mIFN-λ3基因的克隆、原核与真核表达载体的制备和原核真核表达、及对mIFN-λ3蛋白抗肿瘤细胞增殖与抗病毒分子机制的初步探讨,为进一步进行mIFN-λ3的理论研究及临床应用研究奠定了基础。