研究背景和目的食管癌(Esophageal cancer,EC)是上呼吸消化道中最具有侵略性的恶性肿瘤之一,根据组织学特征可分为两类：食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma.ESCC)和食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EAC)。食管鳞癌与一些导致慢性刺激和炎症反应的因子密切相关,如饮酒、吸烟；而在存在巴雷特食管的情况下则更易发展为食管腺癌管。食管癌的临床表现多为吞咽困难,食物反流甚至食管出血,因此该疾病严重影响人类的生活质量。近年来,尽管各种外科手术技术不断进步,放化疗法、辅助化学疗法广泛应用,但食管癌患者5年生存率仅为14%左右,具权威统计,食管癌依然是世界上第六大癌症杀手。目前的研究结果普遍认为食管癌是多基因参与,多因素作用,多阶段发展的疾病,但其确切的机制仍未阐明。已有许多研究探讨了食管癌中癌基因和抑癌基因的改变,利用cDNA芯片技术分析食管癌变不同阶段的基因表达谱。Li等从食管癌组织和正常食管上皮中提取RNA,运用全基因组阵列分析技术,并借助生物信息学筛选出可能对食管癌具有重要致病作用的基因和通路。该研究结果发现,sPINK8在食管癌组织与正常食管及癌旁组织相比表达量明显下调,提示SPINK8可能是一个新的抑癌基因,在食管癌的发生发展中起着重要的作用。因此,本研究从正常人血液中调取SPINK8基因并构建重组载体,转染食管癌EC9706细胞,以探究SPINK8在食管癌细胞中的作用,为食管癌的发生发展提供更全面的理论依据。材料和方法1.提取正常人外周血总RNA,反转录成cDNA,设计引物调取sPINK8基因。2.构建克隆载体及原核表达载体,IPTG诱导表达,确保所调取的SPINK8基因可以正常表达。3.构建真核重组载体并转染EC9706细胞系,筛选出稳定转染细胞系。4.MTT比色法测定sPINK8基因对EC9706细胞增殖活性的影响,计算细胞增殖抑制率。5.采用流式细胞法检测SPINK8基因对EC9706细胞凋亡的影响。6.通过transwell细胞迁移实验检测SPINK8对EC9706细胞迁移能力的影响。7.所有实验数据采用SPSS17.0统计软件分析处理。两组间的比较用T检验,检验水准P<0.05。结果(1)MTT比色法结果表明：转染SPINK8重组质粒组与正常组相比,存活细胞的数量下降,增殖抑制率为24.53%。转染SPINK8重组质粒组与正常组差异具有统计学意义,P=0.013；转染空质粒组与正常组差异无统计学意义,P=0.145。(2)流式细胞术结果表明：转染SPINK8重组质粒组的细胞凋亡率为较正常组明显增加,且其差异具有统计学意义,P值为0.014。而转染空质粒组与正常组比较无显著性差异,P=0.057。(3)Transwell细胞迁移实验结果表明：转染SPINK8重组质粒组与正常组相比,穿过transwell小室的细胞数量明显减少,且其差异具有统计学意义,P值为0.003。转染空质粒组与正常组差异不显著,P=0.195。结论1)SPINK8基因对EC9706细胞的增殖具有一定的抑制作用,并促进细胞凋亡。2)SPINK8基因能够降低EC9706细胞的迁移能力