【摘 要】
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目的DAPK3是本研究组于2011年利用酵母双杂交系统筛选出来的LOH12CR1可能的直接互作蛋白。LOH12CR1可能是—抑癌基因,但其具体生物学功能及作用机制尚不清楚。验证LOH12CR1和
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目的DAPK3是本研究组于2011年利用酵母双杂交系统筛选出来的LOH12CR1可能的直接互作蛋白。LOH12CR1可能是—抑癌基因,但其具体生物学功能及作用机制尚不清楚。验证LOH12CR1和DAPK3在细胞内是否真正存在互作关系,为LOH12CR1功能的研究提供切入点。方法1.构建pCDNA3.1-myc-his-LOH12CR1、 pCMV-tag2-DAPK3重组载体,并对HEK293细胞共转染LOH12CR1和DAPK3重组载体,利用免疫共沉淀技术验证两者在细胞内的的相互作用；2.将LOH12CR1和DAPK3共转染于HEK293细胞,通过激光共聚焦技术观察两者在HEK293内的免疫荧光亚细胞水平共定位情况。结果1.免疫共沉淀实验显示LOH12CR1与DAPK3在HEK293细胞内存在相互作用；2.免疫荧光亚细胞共定位实验初步提示LOH12CR1和DAPK3存在亚细胞水平共定位,且主要共定位于胞浆。结论本研究证实了LOH12CR1与DAPK3在细胞内的相互作用关系,目前已知DAPK3的主要生物学功能为促进凋亡,提示LOH12CR1可能通过与DAPK3的相互作用参与调控细胞凋亡过程,其具体作用机制我们将进行进一步的研究以明确。
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