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黑素瘤是一种恶性程度极高的肿瘤,它来源于黑素细胞,可发生在皮肤、眼睛、耳等部位。黑素瘤尤其是分化程度较低的分型,一般病情进展迅速,侵袭性较高。瞬时感受器电位通道(transient receptor potential channel,TRP channel)是一组非选择性阳离子通道,目前已知在哺乳动物体内存在28种TRP通道家族成员,根据氨基酸序列的同源性,它们可分为6个家族,分别是:TRPC(Canonical)、TRPV(Vanilloid)、TRPM(Melastatin)、TRPP(Polycystin)、TRPML(Mucolipin)、TRPA(Ankyrin)。在这个大家族中,部分通道蛋白对温度敏感,可以被各自相应的阈温度激活,在这组温度敏感TRP通道中研究较多的有:TRPA1、TRPM8、TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV4。这六种温度敏感TRP通道中,已有报道TRPA1和TRPM8在黑素瘤细胞中表达。TRP通道作为离子通道,可通过调节细胞内钙离子浓度来参与多种生理病理活动。文章试图寻找温度敏感TRP通道在不同黑素瘤细胞及黑素细胞中的表达差异性,并将进一步研究通道在黑素瘤细胞中的作用。目的:检测和比较黑素瘤细胞和黑素细胞中温度敏感TRP离子通道表达的差异,研究TRPM8通道激活剂薄荷醇及TRPV2通道激活剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)对黑素瘤细胞增殖及细胞周期的影响,以探讨TRP通道在黑素瘤细胞中的病理生理作用。方法:(1)通过蛋白质免疫印迹的方法,检测人黑素瘤细胞SK-MEL-3、A2058、G361、A375以及黑素细胞Primary Epidermal Melanocytes(ATCC?PCS-200-013)中是否有TRPA1、TRPM8、TRPV2、TRPV4 4种温度敏感TRP通道蛋白的表达,并比较黑素瘤细胞与黑素细胞之间各通道蛋白表达水平的差异性。(2)通过实时荧光定量PCR的方法,检测人黑素瘤细胞SK-MEL-3、A2058、G361、A375以及黑素细胞Primary Epidermal Melanocytes(ATCC?PCS-200-013)中上述4种通道m RNA的表达水平及差异性。(3)通过MTT实验检测不同浓度的薄荷醇及2-APB对黑素瘤细胞A2058的增殖的影响。(4)通过流式细胞术检测不同浓度的薄荷醇和2-APB对细胞周期的影响。结果:(1)蛋白质免疫印迹和实时荧光定量PCR的结果显示,黑素瘤细胞中TRPA1、TRPM8和TRPV4通道的蛋白和m RNA表达水平较黑素细胞上调,TRPV2通道的蛋白和m RNA表达水平较黑素细胞下调。(2)MTT结果显示,当加药培养12小时后,浓度高于1m M的薄荷醇和浓度高于0.2m M的2-APB抑制黑素瘤细胞A2058的增殖(P<0.05),抑制率随药物浓度增加而升高。(3)光镜下观察发现0.2m M2-APB加药培养48小时可有效抑制黑素瘤细胞A2058的生长。(4)流式细胞术检测细胞周期显示加药培养12小时,不同浓度的薄荷醇和2-APB对细胞周期无明显影响;48小时后,0.4m M 2-APB可使黑素瘤细胞A2058 S期细胞增加。结论:(1)黑素瘤细胞中表达TRPA1、TRPM8、TRPV2、TRPV4 4种温度敏感TRP通道。(2)在蛋白质与m RNA水平,黑素瘤细胞中TRPA1、TRPM8和TRPV4通道表达水平与黑素细胞相比呈上调趋势,TRPV2通道表达水平呈下调趋势。(3)TRPM8激活剂薄荷醇和TRPV2激活剂2-APB可以抑制黑素瘤细胞A2058增殖,但是薄荷醇对黑素瘤细胞A2058细胞周期无明显影响,而2-APB可以使黑素瘤细胞A2058细胞周期阻滞于S期。