论文部分内容阅读
目的:
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是临床常见的内分泌紊乱性疾病，在育龄妇女中发病率是5％-10％;PCOS本身是一种病因和临床表现十分复杂的异质性疾病，血清高雄激素血症是其典型的临床表现之一，但是发病机制还不完全清楚，因此本研究主要是:
1、通过注射脱氢表雄酮(DHEA)建立类PCOS大鼠模型;
2、探讨类固醇激素调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein，StAR)，3β-羟基类固醇(3β-hydroxy steroid dehydrogenase，3β-HSD),17β-羟基类固醇(17β-hydroxy steroiddehydrogenase，17β-HSD)，细胞色素 P450芳香化酶(cytochrome P450Aromatase，P450arom)及其调控因子类固醇生成因子-1(Steroidogenic factor-1，SF-1)在PCOS中的表达及与卵巢激素的关系。
方法:
21日龄的SD大鼠30只，随机分为实验组(PCOS组，n=20)和对照组(NC组，n=10)。PCOS组:于23日龄开始，每日16:00颈后背皮下注射DHEA0.6 mg/100g体重（溶于0.2 ml注射用大豆油），连续20天，并同时进行阴道涂片，以观察其动情周期的变化;NC组:每日颈后背注射0.2 ml的大豆油，其余同PCOS组。于42日龄20:00禁食禁饮，次日晨称体重及阴道涂片，收集血清，放射免疫法(RIA)和ELISA检测血清激素水平。取双侧卵巢，称取重量，测量体积（体积=长×宽×高×0.5），卵巢体积和重量均是左右卵巢之和;随机取PCOS组和NC组各一侧卵巢，中性福尔马林固定，常规包埋，切片，行HE染色和免疫组化，光镜观察;同时，用2.5％戊二醛固定另一侧卵巢组织，常规包埋，超薄切片，电子染色后，进行透射电镜观察。部分卵巢于-80℃保存，用Westernblot和RT-PCR待测其中蛋白或酶及mRNA的表达。
结果:
1、卵巢的一般情况两组大鼠发育良好，毛色润泽，行为反应无异常。与NC组相比，PCOS组的体重明显增高（P＜0.05）;卵巢的重量和体积未见显著变化(P＞0.05)。
2、血清激素水平的评估 PCOS组大鼠血清睾酮水平非常显著性高于NC组（P＜0.01），雌二醇水平显著高于NC组（P＜0.05），孕酮水平较NC组有所降低，但无显著差异。
3、阴道涂片观察阴道涂片显示，与NC组相比，PCOS组大鼠失去了动情周期的规律性交化，主要表现为动情期和动情间期延长，大部分停留在动情期和动情间期。
4、卵巢的外观和形态学变化 PCOS组大鼠卵巢稍呈苍白色，可见多个囊性卵泡，双侧卵巢不对称性增大;HE染色结果显示，PCOS组多个卵泡囊性扩张，扩张的卵泡中颗粒细胞层减少，外包绕梭形的卵泡膜细胞;另可见少量黄体形成。电镜结果显示，PCOS组卵泡膜细胞内含有大量的脂滴，细胞器丰富，颗粒细胞核固缩，内质网扩张，线粒体内出现空泡。
5、免疫组化检测StAR、SF-1、3β-HSD、17β-HSD和P450arom的变化 StAR主要表达于卵泡外围的卵泡膜细胞，以及黄体内的黄素化颗粒细胞的胞浆内。PCOS组3β-HSD特异性染色主要定位在卵泡膜细胞及黄素化的颗粒细胞中;17β-HSD在PCOS模型中主要集中在囊状卵泡的颗粒细胞层，外围的卵泡膜细胞;P450arom表达于在囊状卵泡的颗粒细胞层。SF-1主要表达于卵泡的颗粒细胞、卵泡外围的卵泡膜细胞及黄体内的黄素化颗粒细胞的胞浆内。
6、StAR、SF-1、3β-HSD、17β-HSD和P450arom mRNA含量的变化与NC组相比，PCOS组StAR，SF-1，3β-HSD和17β-HSD mRNA水平明显升高（P＜0.05）;与NC组比较，PCOS组中P450arom mRNA含量则非常显著地降低了(P＜0.01)。
7、Western blot检测各蛋白的变化与NC组相比，PCOS组StAR，SF-1和3β-HSD蛋白表达明显升高(P＜0.05);17β-HSD蛋白表达非常显著的升高(P＜0.01);而PCOS组P450arom蛋白表达明显低于NC组（P＜0.05）。
结论:
1、StAR、3β-HSD和17β-HSD共同参与了PCOS大鼠模型卵巢的激素调节;芳香化酶P450arom未直接参与PCOS中E2的调节.
2、SF-1能够直接刺激目标类固醇激素合成酶(StAR、3β-HSD和17β-HSD)，还可促进睾酮的生成。
3、DHEA诱导的SD大鼠出现了与PCOS患者相似的卵巢病理改变及雄激素升高等内分泌变化，同时StAR、3β-HSD、17β-HSD和P450arom的蛋白及基因表达，及转录调控子SF-1的表达均与PCOS患者中的表达结果相符，提示该模型是一种较为理想的PCOS动物模型