1993年以来，我国沿海省份相继发生养殖对虾大批死亡现象，损失严重，引起国内外研究者的重视。经过一段时间的努力研究后，我们率先报导了引起该病的病原是一种无包含体的杆状病毒。以后，该病毒的一些其他特性及引起对虾的病理学及组织学的变化又陆续见诸于报导。我们已经报导了该杆状病毒的一个早晚期基因1197bp的克隆和序列分析，并针对此基因设计了二个核酶，在体外成功地对此基因进行了切割。为今后利用核酶来抑制对虾病毒的增殖和控制对虾病毒病打下进一步研究的基础。本文我们用基因克隆的方法将该病毒的早晚期基因1197基因克隆到pGEX-3X、pTXB11和pTYB12表达载体中。该基因从我们构建的病毒基因库用PCR的方法进行扩增。合成的引物根据已测得1197基因读框3′及5′端顺序合成寡聚核苷酸片段。其上游引物1197S1：5′CG GGA TCC ATG TTT AGT GAG AAT TTT G3′，下游引物1197S2：5′CG GAA TTC TTA ACC GCA GCT GCA GTT TC3′。PCR产物用低熔点胶方法回收片段。纯化产物用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切，pGEX-3X用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切，产物经低熔点胶回收方法进行纯化，进行常规连接，转化。转化的菌株为DE3钙细胞。用酶切和PCR方法筛选并鉴定含1197基因的重组表达质粒pGEX3X-1197，然后经测序确证读框正确。诱导的条件为IPTG0.2mM浓度，37℃诱导5-6小时。冰浴下进行超声波破菌，离心得上清，经谷胱甘肽S-转移酶 （GST）亲和层析并解离得到初步纯化的融合蛋白。因蛋白表达量很高， 表达菌株形成包涵体，超声波破菌后上清含量极少，且杂蛋白GST的 量很高，给纯化蛋白造成一定的困难，用GST亲和柱分离到的蛋白其 中GST蛋白含量显著大于融合的蛋白的量，所分离到的蛋白没有进行 下一步实验的意义。于是另外构建了表达质粒 pTXB1 97和 pTYB1 97表达质粒。经测序证明克隆正确。但是不能进行有效的表 达。由于该两个表达质粒是新产品，所以原因无法考证川 pGEX3X1 97 表达质粒的诱导表达产物超声波破菌后的包涵体，进行处理，得到尿素 变性后的高浓度融合蛋白的混合物。用梯度的尿素进行透析，不能恢复 蛋白原先结构，而不能与GST亲和柱结合，也因此不能分离到蛋白。 将该蛋白混合物用FPLC的方法进行分离，分离的柱为CM阴离子交换 柱，用不同梯度的盐浓度进行洗脱，收集到纯的融合蛋白。