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目的:研究STYK1/NOK基因在肝癌细胞系HepG2(肝母细胞瘤来源)和Huh-7(肝细胞肝癌来源)中的作用并明确其作用机制。探讨过表达STYK1/NOK对HepG2细胞凋亡、细胞增殖的影响,反向验证,抑制STYK1/NOK蛋白表达对HepG2细胞凋亡、增殖及细胞周期的影响。随后,在Huh-7细胞中验证,明确STYK1/NOK对肝癌细胞系细胞增殖的影响,以期揭悉STYK1/NOK影响肝癌细胞增殖的具体作用机制。方法:在HepG2细胞中过表达STYK1/NOK,通过western blotting检测蛋白表达情况,确定STYK1/NOK过表达。使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测分别转染0,2,6μg STYK1/NOK质粒的HepG2细胞的凋亡情况,每组重复3组,根据检测结果制作柱形图。转染0,2,6μg STYK1/NOK质粒,48小时后,应用CCK8细胞增殖实验检测过表达STYK1/NOK对HepG2细胞增殖的影响,每组重复三组,随后应用OD值制作柱形图。为了明确检测结果,应用siRNA抑制HepG2细胞STYK1/NOK蛋白表达后行细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期实验,并采用western blotting检测凋亡相关蛋白caspase 3,cleaved-caspase3及凋亡周期蛋白CDC25A,CDK2蛋白的表达情况,明确STYK1/NOK对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。并进一步明确具体作用机制。随后,相关实验在另一株肝癌细胞系Huh-7细胞中进行验证。过表达STYK1/NOK及通过应用siRNA抑制Huh-7细胞STYK1/NOK蛋白表达后,行细胞凋亡实验,并应用western bloting检测抑制STYK1/NOK细胞凋亡相关蛋白caspase 3及cleaved-caspase 3的表达情况,再进一步检测抑制STYK1/NOK蛋白表达后的细胞周期分布情况。结果:在转染48h后,收集细胞,提取蛋白,行western blotting检测,检测结果表明STYK1/NOK的表达与转染的质粒浓度相关,呈剂量依赖效应。使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测过表达后HepG2细胞凋亡情况,结果发现在转染0,2,6μg STYK1/NOK质粒组,细胞凋亡百分比逐渐减少,分别为21.1%,19.7%,16.3%,重复三组,应用t检验统计,具有统计学意义(P<0.05),表明转染STYK1/NOK抑制了HepG2细胞的凋亡。应用CCK8细胞增殖实验进行检测,研究过表达STYK1/NOK基因对细胞增值的影响。在转染48 h后,加入CCK8试剂,2 h后进行检测,结果发现过表达STYK1/NOK促进HepG2细胞增殖。为了进一步验证实验结果,应用siRNA抑制HepG2细胞STYK1/NOK蛋白表达,再次行细胞凋亡实验,实验结果表明抑制STYK1/NOK蛋白表达促进细胞凋亡,分别转染0,2,6μg si-STYK1/NOK质粒,凋亡率分别为30.2%,30.6%,36.5%。每组重复三组,行t检验,发现转染0μg si-STYK1/NOK质粒组和转染6μg si-STYK1/NOK质粒组凋亡率差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞增殖实验结果表明,抑制STYK1/NOK抑制HepG2细胞增殖(P<0.01)。Western blotting结果表明抑制STYK1/NOK蛋白表达后,caspase 3蛋白表达减少,cleaved-caspase 3蛋白表达增加,表明抑制STYK1/NOK裂解活化了caspase3,促进HepG2细胞凋亡。细胞周期结果表明,抑制STYK1/NOK蛋白表达后,S期细胞增多,G0/G1、G2/M期细胞减少,Western blotting结果表明抑制STYK1/NOK蛋白表达后,CDC25A蛋白和CDK2蛋白表达下调,表明抑制STYK1/NOK将HepG2细胞阻滞在S期,从而抑制细胞增殖。随后,检测结果在Huh-7细胞中进行验证,细胞凋亡实验、细胞周期实验结果均与HepG2结果相符。抑制Huh-7细胞STYK1/NOK蛋白表达后,通过裂解活化caspase 3促进细胞凋亡。结论:研究表明抑制STYK1/NOK促进HepG2和Huh-7细胞凋亡,裂解活化凋亡执行蛋白caspase 3,抑制HepG2细胞增殖。抑制HepG2细胞STYK1/NOK蛋白表达后,细胞周期检测结果显示S期细胞明显增多,细胞周期相关蛋白CDC25A和CDK2表达下调,表明抑制STYK1/NOK将细胞阻滞在S期,抑制细胞周期进展,抑制细胞增殖。相反的,研究结果表明STYK1/NOK可以促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。实验结果表明,STYK1/NOK可能成为肝癌治疗的靶向基因,但由于本研究主要是在细胞水平,尚需体内实验进一步验证。