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胃癌的发病率及死亡率一直居高不下,严重危害人们的心身健康。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染是世界上最常见的细菌感染之一,感染可引起一系列胃癌前病变,是已知的胃癌最大的危险因素。Semaphorin 5A(SEMA5A)是神经轴突导向分子Semaphorins家族成员之一,我组前期发现SEMA5A与H.pylori感染对胃癌的侵袭转移有促进作用。个体间的胃癌易感性差异很大,而基因多态性为胃癌易感性差异提供了重要的基础。SEMA5A有多个多态位点,因此研究SEMA5A基因多态性对H.pylori感染以及胃癌发生风险的影响,有助于为胃癌高危人群的发现和胃癌早期预防诊断提供新的理论依据。[目 的]研究Semaphorin 5A基因SNP位点6个标签SNPs(rs693487、rs6896702、rs788469、rs805153、rs1024489、rs2696371)在云南地区汉族胃癌患者和健康者的分布特点,以及与H.pylori感染的相关性,来探讨SEMA5A基因多态性与H.pylori感染及胃癌发生的关系,可为胃癌高危人群的发现、胃癌的预防和早期诊断提供新的生物学标志物;初步探讨SEMA5A与H.pylori感染对胃癌细胞发生上皮间质转化的影响,为进一步研究胃癌发生发展机制提供理论基础。[方 法]本文基于临床病例对照的研究方法,收集2018年10月至2019年12月在昆明医科大学第一附属医院确诊为胃腺癌的患者50例为病例组。对照组为同时期在我院体检的健康体检者60例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测样本血清中抗H.pylori特异性IgG抗体及尿素呼气试验以分析样本H.pylori感染情况;采用离心吸附柱法试剂盒对样本基因组DNA进行提取;采用TaqMan探针法对两组的SEMA5A基因6个SNP位点的基因型进行检测分析,并用SNaPshot测序法测序进行验证。采用x2检验和t检验对两组的临床资料进行统计描述,用卡方检验分析各基因型基因频率的分布,采用logistic回归模型进行风险分析,并对性别和年龄等因素进行校正,以分析幽口螺杆菌感染与基因多态性在胃癌发生过程中的交互作用。采用Western Blot检测胃癌细胞SGC7901、SEMA5A低表达SGC7901 与 H.pylori 共培养中 SEMA5A、TGFβ1、E-Cadherin、Vimentin 的表达水平以研究SEMA5A与H.pylori感染对胃癌细胞的影响。[结 果]1.病例组H.pylori感染率为58.0%,对照组的H.pylori感染率为35.0%,其差异具有统计学意义(P=0.016)。2.病例组及对照组基因频率分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,具有良好的人群代表性。3.rs693487位点的三种基因型(野生型TT、杂合型TC、突变型CC)在病例组的分布频率分别为22.0%、50.0%、28.0%,在对照组的分布频率分别为25.0%、35.0%、40.0%,基因型在两组间分布无统计差异(P>0.05)。logistic回归显示:在对年龄、性别、幽门螺杆菌感染进行校正和分层分析后,两组间也无差异(P>0.05)。4.rs6896702位点的三种基因型(野生型TT、杂合型TC、突变型CC)在病例组的分布频率分别为52.0%、38.0%、10.0%,在对照组的分布频率分别为55.0%、30.0%、15.0%,三种基因型及显性、隐性模型在两组的分布无差异(P>0.05)。在logistic回归模型中,病例组与对照组基因型也无差异(P>0.05)。而在对性别的分层分析中,女性基因型CT减少了胃癌的发病风险,经多因素调整后OR值为 0.06(95%CI=0.05-0.97)。5,rs788469位点的三种基因型(野生型CC、杂合型CT、变异型TT)在胃癌组的分布频率分别为18.0%、54.0%、28.0%,在对照组的分布频率分别为20.0%、27.0%、13.0%,基因型在两组间分布无统计学意义(P>0.05)。在logistic回归模型中,病例组与对照组基因型无差异(P>0.05)。对性别的分层分析显示rs788469位点男性基因型CT减少了胃癌的发病风险,经多因素调整后OR值为0.24(95%CI=0.06-0.86)。6.rs805153位点的三种基因型(野生型TT、杂合型TC、突变型CC)在胃癌组的分布频率分别为48.0%、42.0%、10.0%,在对照组的分布频率分别为30.0%、38.3%、31.7%。三种基因型在病例组与对照组分布具有统计学差异(P=0.02)。野生TT基因型明显增加患胃癌的风险,与突变CC基因型相比OR值为5.06(95%(CI=1.58-16.1),经年龄、性别、幽门螺杆菌感染调整OR值为4.86(95%CI=1.47-16.0)。而在隐性模型中,与CC基因型相比,TT+TC基因型明显增加患癌风险(P<0.05,OR=4.71,95%CI=1.42-12.2),经多因素校正后 OR 值为 4.26(95%CI=1.41-12.8,P<0.05)。以性别进行分层分析显示:TT+TC基因型与CC基因型相比,明显增加男性胃癌的发病风险,经多因素校正后OR值为9.85(95%CI=0.92-1.03),相反,对女性胃癌的发病风险无影响。按是否感染H.pylori进行分层分析,结果显示:当感染H.pylori时,TT+TC基因型明显增加患胃癌的风险,经多因素调整后OR值为7.51(95%CI=1.28-43.9)。7.rs1024489位点的三种基因型(野生型TT、杂合型TC、突变型CC)在胃癌组的分布频率分别为62.0%、34.0%、4.0%,在对照组的分布频率分别为58.3%、30.0%、11.7%,三种基因型在胃癌组与对照组分布的差异没有统计学意义(P>0.05)。在logistic回归中,经年龄、性别、幽门螺杆菌感染调整后,病例组与对照组间也无显著差异。对性别因素进行分层分析后,女性CT基因型明显减少胃癌发生风险,经多因素调整OR值为0.04(95%CI=0.00-0.78)。8.rs2696371位点的三种基因型(野生型CC、杂合型CT、突变型TT)在胃癌组的分布频率分别为4.0%、38.0%、58.0%,在对照组的分布频率分别为15.0%、33.3%、51.7%。基因型在胃癌组与对照组分布无差异(P>0.05)。在经过多因素校正后,TC基因型P值=0.05,但分布还是无统计学意义。9.Western Blot实验结果显示:与SEMA5A低表达组相比,空白对照组和与H.pylori共培养的SEMA5A低表达组的SEMA5A、TGF-β1、Vimentin表达明显升高,E-Cadherin表达降低。[结论]1.H.pylori感染和SEMA5A基因多态性在胃癌的发生中可能有作用。2.SEMA5A基因的rs693487、rs2696371 SNP位点与胃癌发生及H.pylori感染无关联。3.SEMA5A 基因的 rs6896702、rs788469、rs1024489 SNP 位点虽与胃癌发生及H.pylori感染无关系,但在性别方面与胃癌风险相关。4.SEMA5A基因rs805153位点与胃癌发生风险及H.pylori感染相关,TT基因型明显增加患胃癌风险,且与幽门螺杆菌感染关联。5.SEMA5A与H.pylori感染对胃癌细胞上皮间质转化有影响。