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肝细胞癌是世界上常见的实体瘤,由于其早期诊断困难和治疗方法有限而具有非常高的死亡率。临床研究表明,糖蛋白的异常糖基化与癌症的迁移、侵袭有密切相关的联系。而在糖基化修饰过程中,糖基转移酶占据着重要的地位。GnT-Ⅳa就是糖基转移酶家族的一员,负责催化N-糖聚糖甘露糖核上β-1,4 GlcNAc分支的形成。前期的实验研究发现,在16例HCC组织及癌旁正常组织中,有13例显示GnT-Ⅳa的表达较癌旁正常组织增高。并且在体外,GnT-Ⅳa能够促进肝癌细胞增殖并加快肿瘤的进展。但是GnT-Ⅳa与肝癌细胞迁移、侵袭方面的研究还相对较少。本研究发现GnT-Ⅳa能够促进肝癌细胞的迁移和侵袭,因此对其作用的相关分子机制进行了初步探究。本文采用了qRT-PCR和Western Blot检测了课题组肝癌细胞系GnT-Ⅳa在mRNA和蛋白质水平的基础表达量,并使用慢病毒包装技术将Sk-Hep1和HuH7作为稳定过表达GnT-Ⅳa的细胞。利用Lectin Blot分析GnT-Ⅳa不同表达水平对肝癌细胞中N-糖链的影响。结果发现过表达GnT-Ⅳa后,细胞中的糖链增多;用RNAi技术将其回复后,糖链随着GnT-Ⅳa敲低而减少。然后利用细胞划痕和Transwell小室侵袭实验,分别检测GnT-Ⅳa不同表达水平是否引起肝癌细胞迁移、侵袭水平的变化。结果发现在Sk-Hep1和HuH7细胞中稳定过表达GnT-Ⅳa后,细胞的迁移、侵袭能力明显加强;回复GnT-Ⅳa的表达会导致迁移能力,侵袭能力有所下降。本研究进一步探究GnT-Ⅳa对上述影响的具体分子机制过程中,发现在Sk-Hep1和HuH7细胞中稳定过表达GnT-Ⅳa,波形蛋白vimentin在蛋白水平的表达量明显提高,受体酪氨酸激酶Axl表达量显著提高。当敲低GnT-Ⅳa时,vimentin蛋白水平表达量又有所下降。然后用RNA干扰技术在稳定过表达GnT-Ⅳa的Sk-Hep1和HuH7细胞中靶向敲低vimentin,观察到Axl表达量显著下降,同时细胞的迁移能力,侵袭能力也有所下降。以上结果提示GnT-Ⅳa可能是影响vimentin/Axl的信号通路从而促进了肝癌细胞的迁移和侵袭。综合上述结果,本研究发现了GnT-Ⅳa在肝癌细胞中能提高肿瘤的迁移能力和侵袭能力,而且GnT-Ⅳa可能是通过影响vimentin的表达来调节Axl从而提高肝癌细胞的迁移、侵袭。这些发现对阐明GnT-Ⅳa在肝癌迁移、侵袭过程中的重要作用具有一定的价值,并为靶向药物受体以及抗肿瘤转移研究提供新的思路。