【摘 要】
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目的:探讨DNA拓扑异构酶II (topoisomerase II, Topo II)及特化蛋白1(Specificity protein-1, Sp1)在顺铂(cisplatin,CDDP)对替尼泊甙(tineposide, VM-26)杀伤小细胞肺癌(sma
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目的:探讨DNA拓扑异构酶II (topoisomerase II, Topo II)及特化蛋白1(Specificity protein-1, Sp1)在顺铂(cisplatin,CDDP)对替尼泊甙(tineposide, VM-26)杀伤小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)细胞影响过程中的表达。方法:将H446 细胞(人SCLC 细胞系)于37℃,5% CO2,饱和湿度,含10% 新生牛血清的RPMI 1640 条件下传代培养,待细胞进入对数生长期后进行实验操作。应用MTT 法,分别测定CDDP 血浆峰浓度与不同浓度VM-26 合用对H446细胞24 小时的抑制率,应用金氏公式分析药物合并效应;采用AO/EB 双荧光染色观察细胞活率:配制吖啶橙(AO)和嗅乙啶(EB)各为0.05 mg/ml 的混合染液。加荧光染液于细胞悬液内,吹打混匀、滴至载玻片上,荧光显微镜下观察、照相,分别计算细胞活率;采用Hoechst 33258 荧光染色观察细胞凋亡率:药物作用H446 细胞24 小时后,EDTA 消化,制成1×105 /ml 单细胞悬液,经甲醇:冰乙酸(3:1)4℃固定5分钟,滴加至载玻片上干燥,加Hoechst 33258染色30 分钟,蒸馏水洗片去除多余液体、封片剂封片,置荧光显微镜下观察、照相;采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA 断裂:H446细胞经药物作用24 小时后收集细胞,生理盐水洗涤两次,加入细胞裂解液,4℃裂解30 分钟;加入RNA 酶(50μg/ml)37℃1 小时,蛋白酶K, 50℃3 小时;以酚-氯仿法抽提DNA,3mol/L 乙酸纳、无水乙醇沉淀DNA,离心后,70%
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