【摘 要】
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目的:S1PR2(sphingosine 1-phosphate receptor 2)系七次跨膜G蛋白偶联受体家族成员之一,与其天然配体鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine 1-phosphate,S1P)结合后介导跨膜信号传导,
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目的:S1PR2(sphingosine 1-phosphate receptor 2)系七次跨膜G蛋白偶联受体家族成员之一,与其天然配体鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine 1-phosphate,S1P)结合后介导跨膜信号传导,参与了广泛的生物学效应。研究表明,S1PR2影响免疫细胞的迁移,调节血管渗透性改变,介导神经元的可塑性变化,因此我们推测S1PR2可能参与神经痛的调节。本实验从整体动物、细胞及分子层面逐步探讨S1PR2对神经痛发生发展的影响和机制。方法:建立小鼠部分坐骨神经结扎的神经痛模型,动态观察S1PR2基因表达在坐骨神经和脊髓腰膨大中的变化;检测S1PR2功能基因缺失对生理状态下疼痛阈值的影响,比较野生组和S1PR2功能基因缺失组小鼠部分坐骨神经结扎神经痛模型后疼痛阈值的变化。然后根据疼痛阈值改变的特点,采用实时定量PCR检测坐骨神经炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的变化,免疫荧光检测损伤侧坐骨神经中性粒细胞的浸润以及同侧腰膨大上胶质细胞的活化。采用实时定量PCR和蛋白质印迹检测金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP9)的变化,免疫荧光检测MMP9、IL-1β的定位,同时应用蛋白质印迹和免疫荧光检测MMP9底物蛋白(myelinbasic protein,MBP)的表达。结果:在神经痛模型中,野生型小鼠损伤的坐骨神经S1PR2的基因表达随疼痛阈值的变化降低;S1PR2功能基因缺失不影响生理状态下小鼠的疼痛感受性;小鼠部分坐骨神经结扎的神经痛模型中,S1PR2功能缺失组较野生组在术后3天,其疼痛阈值显著降低(P<0.05),结扎侧的坐骨神经表达的IL-1β增多,中性粒细胞浸润增多,脊髓星型胶质细胞活化增多。损伤坐骨神经中MMP9mRNA相对于野生组升高,MMP9与中性粒细胞、IL-1β共定位表达。MMP9底物蛋白MBP表达降低。结论:S1PR2功能缺失增加小鼠神经痛模型后对疼痛的敏感性,加剧神经痛发生发展。
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