槲皮素对胃癌SGC细胞生长及小凹蛋白-1表达的影响

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目的观察槲皮素(Quercetin, Que)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖、凋亡率、凋亡形态及对小凹蛋白-1(caveolin-1, cav-1)表达的影响,探讨槲皮素对人胃癌细胞凋亡的调节作用及相关机制,以期为槲皮素抗肿瘤的机制研究拓展新的思路。方法1.为确定槲皮素是否对人胃癌细胞株SGC-7901细胞生长具有调节作用分别将5、10、20、40、80umol/l的五个浓度的槲皮素与SGC-7901细胞共同培养,分别培养48h,72h后检测槲皮素对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖活性的影响。2.为确定槲皮素是否对人胃癌细胞SGC-7901细胞形态产生影响在经不同浓度的槲皮素处理胃癌细胞后,在倒置显微镜下观察各组细胞的形态学改变。3.为确定槲皮素是否对人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡产生影响将不同浓度的槲皮素(20、40、80μmol/L)预处理SGC-7901细胞后,经Annexin V/PI染色,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。4.为确定槲皮素对cav-1蛋白表达的影响采用不同处理浓度的槲皮素(20、40、80μmol/L)预处理SGC-7901细胞后,western blotting法检测细胞中cav-1表达的变化。结果1.槲皮素可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖:本实验应用MTT法观察分析槲皮素对胃癌SGC7901细胞存活率的影响,分别以5、10、20、40、80μmol/L三个浓度的TG与RAW264.7细胞共同培养,于24、48h、72h三个时间点测定A值并计算胃癌细胞的生长抑制率,结果显示,在各时间段内20、40、80umol/lQue对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用与对照组相比差异显著(P<0.05),且呈剂量依赖性。2.槲皮素可以影响胃癌细胞SGC-7901形态:倒置显微镜下观察对照组正常的胃癌SGC-7901细胞数量多,形态呈立方形,细胞间距大,细胞呈单层贴壁式生长,生长舒展,脱落几乎不可见;经含槲皮素培养基处理后,细胞的体积变小、变圆,皱缩、脱落,可见细胞悬浮于培养液中,核颜色加深,折光性增强,细胞膜完整但出现发泡现象,说明此时细胞已出现凋亡的形态学变化。与对照组相比,加入不同浓度的槲皮素处理后,细胞形态随浓度的增加凋亡程度越发严重,说明细胞的凋亡的形态学改变和槲皮素浓度也呈现剂量依赖。3.槲皮素可以促进胃癌细胞SGC-7901凋亡:经槲皮素预处理细胞,采用AnnexinV-FITC/PI双标记染色,在流式细胞仪下检测各组胃癌SGC-7901细胞的凋亡率。结果显示,对照组总凋亡率为(5.62±1.65)%;经过Que(10、20、40和80umol/l)后,总凋亡率分别为(11.39±1.13)%、(32.69±1.40)%、(66.72±1.96)%、(72.39±1.30)%,均较对照组明显增加(P<0.05),且呈剂量依赖性。4.槲皮素可以抑制胃癌细胞SGC-7901中cav-1蛋白的表达:SGC-7901细胞经不同浓度的槲皮素处理24h后,我们采用westernblot检测各组细胞中caveolin-1表达的变化。结果显示,实验组各组细胞中caveolin-1蛋白表达较对照组明显降低,10、20、40、80umol/lQue处理组的相对蛋白含量较对照组分别降低了46.2%、62.7%、95.0%和98.7%(P<0.05),差异明显,有统计学意义。结果提示槲皮素可抑制胃癌SGC-7901细胞caveolin-1的蛋白表达。结论1.槲皮素可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖并影响其细胞形态。2.槲皮素可以促进胃癌SGC-7901细胞凋亡。3.槲皮素对胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用机制可能与caveolin-1表达下降有关。
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