目的 ①构建携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad-MMP2^AS,为探讨抑制肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）生长、侵袭和转移的方法提供实验基础。②分析重组腺病毒介导反义MMP2基因对人HCC细胞侵袭性的抑制作用,探讨抑制作用的机理。③观察重组腺病毒介导反义MMP2基因对人血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）生长的作用,探讨它抑制肿瘤血管生成的机理,进一步探讨其抑制HCC生长的机理。④观察重组腺病毒介导反义MMP2基因对活体HCC的抑制作用,探讨Ad-MMP2^AS对HCC的治疗潜力。 方法 从Genbank查得二型基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase-2,MMP2）基因cDNA全序列,选择5′端转录起始位点附近长约500bp的基因段为目的基因片段,设计特异性克隆引物。从人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中提取总RNA,以总RNA为模板用逆转录聚合酶链反应（reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）扩增MMP2基因片段。将经基因测序证实为正确的基因片段反向克隆到重组腺病毒载体AdEasy系统中的穿梭质粒pAdTrack-CMV的多克隆位点（multiple cloning site,MCS）,构建出携带反义MMP2基因片段的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-MMP2^AS;再将pAdTrack-CMV-MMP2^AS与重组腺病毒载体AdEasy系统中的骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,经293细胞包装生成携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad-MMP2^AS。同时,构建空白病毒（Ad-CMV）作为对照。用逐步稀释法通过荧光显微镜下计数发绿色荧光的点数（expression-forming units,efu）,检测绿色荧光蛋白（green fluorescence protein,GFP）的表达,确定Ad-MMP2^AS和Ad-CMV的滴度。用感染复数（multiplicities of infection,MOI）为100的Ad-MMP2^AS和Ad-CMV分别感染人肝癌细胞株（Bel-7402）和人血管内皮