第一部分pit-1、c-myc基因在垂体生长激素腺瘤中表达的生物学意义目的：1、观察垂体特异转录因子Pit-1、C-myc基因在垂体生长激素腺瘤中的表达。2、研究pit-1基因、c-myc基因与垂体生长激素腺瘤GH水平的关系，并分析其相关性。3、探讨pit-1基因、c-myc基因在垂体生长激素腺瘤发病机制中可能的作用。方法：用免疫组织化学链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法（SABC）和图像分析技术测定Pit-1蛋白、C-myc蛋白在垂体生长激素腺瘤中的表达。结果：1、Pit-1蛋白在全部的GH腺瘤中均有高表达，与对照组相比，有显著性差异（P＜0.01）。GH瘤组中pit-1的表达量与其术前的激素水平呈显著正相关（r=0.966）。2、C-myc蛋白在26例GH腺瘤中有19例表达，表达率为73.1％，正常垂体组织中未见表达，二者比较有显著统计学差异（P＜0.01）。C-myc的表达与激素水平呈相关性。结论：1．pit-1基因在所有生长激素腺瘤中均高表达，其表达与GH水平、肿瘤的侵袭性呈正相关，在GH腺瘤发病机制中起重要作用。2．c-myc基因在绝大多数GH腺瘤中有表达，其表达与GH水平、肿瘤的侵袭性呈正相关，在垂体生长激素腺瘤细胞增殖、肿瘤的侵袭性方面发挥重要作用。第二部分抑制pit-1对GH腺瘤细胞生物学行为的影响目的：1、观察pit-1-AODN对生长激素腺瘤细胞增殖、激素水平的影响；2、观察pit-1-AODN对GH腺瘤细胞凋亡及细胞周期的影响。3、观察pit-1-AODN对GH腺瘤细胞中Pit-1、pit-1-mRNA和C-myc、c-mycmRNA的表达调控。4、探讨pit-1基因与c-myc基因的相关关系及pit-1-AODN抑制GH腺瘤细胞增殖、激素水平及诱导瘤细胞凋亡和改变细胞周期的作用机制。方法：1、以脂质体为载体包裹pit-1-AODN，制成能进入细胞内的pit-1“反义基因封条”；以pit-1正义寡核苷酸（SODN）为对照。2、用MTT法测定pit-1-AODN对GH腺瘤细胞增殖的影响。3、RIA法测定Pit-1ODN对GH腺瘤细胞分泌生长激素的影响。4、用流式细胞仪（PCM）检测细胞凋亡和细胞周期的改变。5、免疫细胞化学方法测定pit-1-AODN对GH腺瘤细胞中pit-1、c-myc蛋白表达的变化。6、用RT-PCR法检测干预前后pit-1mRNA、c-mycmRNA表达的变化。结果：1、pit-1-AODN在一定的时间、浓度范围内，呈剂量、时间依赖性方式抑制肿瘤细胞生长，正义组、对照组无此作用。2、pit-1-AODN对肿瘤细胞分泌GH激素水平的抑制作用表现出时间和剂量依赖性。20μmol/L组在24、48、72h时对GH水平的抑制率分别是9.23％、23.1％、46.0％，各组间相比较，有显著性差异（各P＜0.05），96h组与72h组间比较，无统计学差异（P＞0.05），120h组与各组比较，各P＜0.01。3、不同浓度的AODN作用于GH腺瘤细胞48h后，均显示出亚G₁峰（为凋亡峰），AODN呈剂量依赖性非线性方式诱导其凋亡，且呈浓度依赖性改变细胞周期的分布，在一定浓度范围内，随浓度的增加，G₂/M细胞比例增加。4、在12例组织标本中，全部有pit-1、pit-1mRNA的表达，经pit-1AODN（20μM、40μM组）处理后，10例pit的表达均明显下降；9例有C-myc、c-mycmRNA的表达，经pit-1AODN处理后，7例C-myc、c-mycmRNA的表达均明显下降，2例表达下降不明显。统计学分析表明，Pit-1、pit-1mRNA和C-myc、c-mycmRNA在干预前后的表达有显著性差异（P＜0.05）。结论：1、Pit-1AODN对GH腺瘤细胞的增殖、GH水平有较强的抑制作用。2、Pit-1AODN够明显抑制GH腺瘤细胞pit-1、pit-1mRNA和C-myc、c-mycmRNA的表达。第三部分pit-1反义寡核苷酸对奧曲肽治疗GH腺瘤作用影响的实验研究目的：1、观察pit-1反义寡核苷酸对奥曲肽抑制GH腺瘤细胞作用的影响。2、与奥曲肽对照研究，评价Pit-1AODN治疗垂体GH腺瘤的应用效果和前景，为以pit-1为靶点治疗垂体GH腺瘤的应用提供理论和实验依据。方法：1、MTF法测定pit-1AODN对Octreotide抑制GH瘤细胞增殖抑制的影响。2、RIA法测定pit-1AODN对Octreotide抑制细胞培养液GH水平的影响。3、FCM测定pit-1AODN对Octreotide诱导细胞凋亡及细胞周期改变的影响。4、Western blot法测定pit-1AODN和Octreotide对GH腺瘤细胞中pit-1、c-myc蛋白表达的影响。5、Boyden小室体外侵袭试验，比较pit-1AODN和Octreotide对GH腺瘤细胞侵袭力的影响。结果：1、在96、120h时，pit-1AODN与Octreotide两组间比较，对GH腺瘤细胞增长抑制有统计学差异（P＜0.05），余时间点两组间无差异。二者联合应用时，Octreotide对pit-1AODN的作用有协同作用。2、48h时，pit-1AODN组与Octreotide组相比，GH水平显著下降，有统计学差异（P＜0.05），余时间点二者间无差异。D组GH水平明显受抑制，与B、C及对照组相比，有高度显著性差异（P＜0.01）；3、AODN组在一定范围内，随时间的增加，G₂/M细胞比例增加。在Octreotide组，G₀/G₁期细胞比例增加，S期细胞比例减少，有时间依赖性。D组诱导细胞凋亡的作用明显优于B、C组，具有显著的统计学差异（P均＜0.05）。4、pit-1AODN较Octreotide对pit-1、c-myc蛋白的表达有明显的抑制作用。5、pit-1AODN较Octreotide能降低GH腺瘤细胞的侵袭能力。结论：1、pit-1AODN与Octreotide均能显著抑制GH腺瘤的增殖、GH水平，但pit-1AODN出现抑制时间早，效果好。2、pit-1AODN与Octreotide通过不同的途径均能促进细胞凋亡、改变细胞周期，二者均有较好的协同作用。3、pit-1AODN在抑制c-myc蛋白表达、抑制GH腺瘤细胞侵袭性方面，明显优于Octreotide。4、以pit-1为靶点治疗GH腺瘤具有良好的前景。