广西10例人芽囊原虫基因型和同工酶谱的研究

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目的:观察广西10例人芽囊原虫分离株基因型及其苹果酸脱氢酶(MDH,EC 1.1.1.37)、碱性磷酸酶(ALP,EC.3.1.3.1)、乳酸脱氢酶(LDH,EC.1.1.1.27)和酯酶(EST,EC.3.1.1.1)的同工酶谱特征,为人芽囊原虫分类学研究提供科学依据。方法:从感染者粪便中分离人芽囊原虫,体外培养,纯化虫体,提取基因组DNA。用已知的7对特异性STS引物对基因组DNA进行PCR扩增来鉴定基因型;分别收集各分离株的虫体制备同工酶电泳样品,采取不连续性聚丙烯酰胺凝胶垂直板状电泳方法分离,特异性底物染色,以相对迁移率标记酶带。结果:10例人芽囊原虫分离株中有8例在应用SB83引物进行PCR扩增后出现特异性的阳性条带,可确定为基因1型。另外2例分离株经7对引物扩增均为阴性,为未知基因型。10例人芽囊原虫分离株在MDH酶谱中,共出现7条酶带,常见的酶带有Rm34,Rm47,Rm51、Rm55和Rm59,10例分离株完全一致的酶带有Rm34和Rm51;在ALP酶谱中共出现5条酶带Rm22、Rm25、Rm28、Rm35和Rm38;在LDH酶谱中,共出现10条酶带,常见的酶带有Rm37和Rm92;在EST酶谱中共出现12条酶带。结论:首次对广西的人芽囊原虫进行基因分型的研究,发现广西存在基因1型和未知基因型。同工酶谱可以反映人芽囊原虫的遗传差异,与基因分型的结果具有一致性,可为人芽囊原虫基因分型提供有力佐证。同工酶谱在揭示相同基因型内各分离株之间的差异性显得更为敏感。本实验研究结果提示广西人芽囊原虫基因1型中存在亚型的可能性。同工酶谱在人芽囊原虫分类学研究中有重要价值。
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