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目的:观察类风湿关节炎(RA)不同证型分布规律及其与血小板活化关系,总结出类风湿关节炎血小板活化的中医证候学特点,探索类风湿关节炎血小板活化的中医证候分布情况。根据RA血小板活化常见中医证候特点,采用中医药干预,探索RA血小板活化的中医证候特点,以期指导临床辨证论治,以便更有效地选择防治的中医药治疗方案。方法:随机选取100例安徽中医药大学第一、第三附属医院门诊与住院的RA患者。以临床的实际证型为主,根据临床所见症状、体征,将中医辨证分型。总结出肝肾不足证、湿热痹阻证、寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证4种常见证型。根据诊断标准设计统一的表格进行观察,研究内容包括患者性别、年龄、病史、症状、体征、舌脉象。同时观察RA患者关节、全身症状积分、生活质量积分、健康评估指数(HAQ)、疾病活动度评分(DAS-28)、疼痛评分(VAS)、实验室指标及血小板活化物的变化。动物实验研究验证RA血小板活化的中医证型特点。将大鼠随机分为4组:正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,来氟米特(LEF)组,新风胶囊(XFC)组,每组10只。除NC组外,向每只动物右后足跖皮内注射Freund’s完全佐剂(FCA)0.1ml致炎,复制成佐剂性关节炎大鼠(AA)模型。致炎后第12天开始给药,各组药物剂量均相当于临床用量的10倍。各组的给药量如下:NC组、MC组:给予生理盐水灌胃,1ml/100g,每天一次;LEF组:将LEF加生理盐水,配制成混悬液(每ml含LEF 0.3mg),按1ml/100g剂量灌胃,每天一次;XFC组:将XFC去除胶囊壳,加生理盐水,配制成混悬液(每ml含药量0.3g),按1ml/100g的剂量灌胃,每天一次。各组均连续灌胃给药4周。观察各组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数,ELISA法测定大鼠血清IL-10、IL-21表达量,流式细胞仪检测外周血GMP-140、CD40L表达,逆转录聚合酶链式反应检测大鼠滑膜组织ETS-1、PAF mRNA的表达。结果:临床研究结果显示:(1)各组证型的血小板参数异常频数(率)的变化:血小板参数异常数最多的为湿热痹阻证。其中,PLT异常率依次降低为湿热痹阻证、寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证、肝肾不足证;MPV异常率依次降低为肝肾不足证、湿热痹阻证、痰瘀痹阻证、寒湿痹阻证;PCT异常率依次降低为湿热痹阻证、肝肾不足证、痰瘀痹阻证、寒湿痹阻证;PDW异常率依次降低为痰瘀痹阻证、湿热痹阻证、肝肾不足证、寒湿痹阻证。(2)血小板参数比较:湿热痹阻证PLT较其他三个证型均升高(P<0.01或P<0.05),寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证PLT较肝肾不足证升高(P<0.01)。寒湿痹阻证PDW较肝肾不足证升高(P<0.05)。(3)生活质量积分比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证、寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证生理功能积分升高,湿热痹阻证健康自我认识升高(P<0.01或P<0.05)。与湿热痹阻证比较,痰瘀痹阻证生理功能积分降低(P<0.05)。(4)关节、全身症状积分比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证、寒湿痹阻证关节疼痛、关节压痛、食欲减退、食后腹胀积分升高(P<0.05),痰瘀痹阻证晨僵积分升高(P<0.05)。与湿热痹阻证、寒湿痹阻证比较,痰瘀痹阻证关节疼痛积分降低(P<0.05)。(5)HAQ、DAS-28、VAS比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证、寒湿痹阻证HAQ、DAS-28、VAS积分升高(P<0.01或P<0.05),痰瘀痹阻证VAS积分升高(P<0.05)。与湿热痹阻证比较,痰瘀痹阻证HAQ积分升高,DAS-28积分降低(P<0.01或P<0.05)。与寒湿痹阻证比较,痰瘀痹阻证DAS-28积分降低(P<0.05)。(6)实验室指标比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证RF、CCP、CRP、ESR升高(P<0.01或P<0.05),寒湿痹阻证RF、CRP、ESR升高(P<0.01),痰瘀痹阻证RF、ESR升高(P<0.05)。与湿热痹阻证比较,寒湿痹阻证CCP降低(P<0.05),痰瘀痹阻证RF、CCP、CRP、ESR降低(P<0.01)。与寒湿痹阻证比较,痰瘀痹阻证RF、CRP、ESR降低(P<0.01或P<0.05)。(7)血小板活化物GMP-140、PAF及ETS-1比较:且在组间比较,湿热痹阻证GMP-140、PAF较其他三个证型均升高(P<0.01或P<0.05)。寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证PAF较肝肾不足证升高(P<0.01或P<0.05)。痰瘀痹阻证ETS-1较肝肾不足证降低(P<0.05)。(8)RA不同证型血小板活化物与其他指标相关性分析:肝肾不足证GMP-140与健康自我认识、Ig G呈正相关,PAF与关节晨僵呈正相关,ETS-1与CCP-AB呈正相关;GMP-140与PCT呈负相关(P<0.05)。湿热痹阻证GMP-140与关节疼痛、食后腹胀、PLT、CRP呈正相关,ETS-1与大便稀溏、DAS-28、ESR呈负相关,PAF与生理功能、关节疼痛、倦怠乏力呈正相关(P<0.01或P<0.05)。寒湿痹阻证GMP-140与关节肿胀、大便稀溏呈正相关,PAF与食欲减退、MPV呈正相关,ETS-1与关节晨僵呈正相关(P<0.05)。痰瘀痹阻证GMP-140与大便稀溏、PLT呈正相关,PAF与关节晨僵、CCP-AB呈正相关,ETS-1与关节肿胀呈正相关(P<0.05)。动物实验研究显示:(1)关节炎模型的观察及药物干预结果:造模后,佐剂关节炎大鼠出现四肢关节红肿、跖趾溃烂,皮毛干枯、稀疏,蜷缩少动,眯眼、呆滞、精神萎靡,反应迟钝,有不同程度的耸毛,饮食量、饮水量下降,部分大鼠出现大便稀溏。第12d开始给药,第25d治疗组大鼠四肢关节红肿逐渐消退,体质量、饮食饮水量开始增加,精神转好,活跃。第35d各治疗组大鼠毛发较光泽,行为活跃。第40d各治疗组大鼠体质量、饮食饮水量仍有增加,其中XFC组较MTX组显著。而正常对照组大鼠状态无明显变化。(2)新风胶囊对足跖肿胀度、关节炎指数的影响:给药前,与NC组相比,MC组、LEF组、XFC组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数显著升高(P<0.01)。给药后,与MC组相比,LEF组、XFC组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数显著降低(P<0.01或P<0.05)。(3)新风胶囊对血清IL-10、IL-21、ETS-1、PAF影响:与NC组比较,MC组细胞因子IL-21、PAF显著升高,细胞因子IL-10、ETS-1显著降低(P<0.05或P<0.01)。与MC组比较,XFC组细胞因子IL-21、PAF表达量降低,细胞因子IL-10、ETS-1表达升高(P<0.05或P<0.01)。(4)新风胶囊对外周血GMP-140、CD40L的影响:与NC组相比,MC组大鼠外周血GMP-140、CD40L显著升高(P<0.01)。与MC组比较,LEF组、XFC组外周血GMP-140、CD40L显著降低(P<0.01或P<0.05)。(5)新风胶囊对滑膜ETS-1、PAF mRNA的影响:与NC组比较,MC组ETS-1mRNA、蛋白表达降低,血小板活化产物PAFmRNA表达升高。与MC组比较,LEF和XFC组ETS-1mRNA升高,PAFmRNA降低(P<0.01或P<0.05)。(6)血小板活化物与足跖肿胀度、关节炎指数、IL-10、IL-21、ETS-1 mRNA关系:GMP-140与足跖肿胀度呈正相关,CD40L与IL-21呈正相关,PAFmRNA与足跖肿胀度呈正相关(P<0.01或P<0.05)。结论RA血小板活化的中医证候以湿热痹阻为主,其次为寒湿痹阻,伴有痰瘀痹阻,血小板活化参与RA湿热痹阻、寒湿痹阻、痰瘀痹阻过程,提示与“脾虚湿盛”病机密切相关。健脾化湿通络中药新风胶囊通过调控ETS-1、IL10表达,降低血小板活化,抑制免疫炎症反应,减少免疫复合物在滑膜组织沉积,改善RA关节症状。