类风湿关节炎不同中医证型血小板活化变化特点及健脾化湿通络方干预研究

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhongdezhufangchuxu
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目的:观察类风湿关节炎(RA)不同证型分布规律及其与血小板活化关系,总结出类风湿关节炎血小板活化的中医证候学特点,探索类风湿关节炎血小板活化的中医证候分布情况。根据RA血小板活化常见中医证候特点,采用中医药干预,探索RA血小板活化的中医证候特点,以期指导临床辨证论治,以便更有效地选择防治的中医药治疗方案。方法:随机选取100例安徽中医药大学第一、第三附属医院门诊与住院的RA患者。以临床的实际证型为主,根据临床所见症状、体征,将中医辨证分型。总结出肝肾不足证、湿热痹阻证、寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证4种常见证型。根据诊断标准设计统一的表格进行观察,研究内容包括患者性别、年龄、病史、症状、体征、舌脉象。同时观察RA患者关节、全身症状积分、生活质量积分、健康评估指数(HAQ)、疾病活动度评分(DAS-28)、疼痛评分(VAS)、实验室指标及血小板活化物的变化。动物实验研究验证RA血小板活化的中医证型特点。将大鼠随机分为4组:正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,来氟米特(LEF)组,新风胶囊(XFC)组,每组10只。除NC组外,向每只动物右后足跖皮内注射Freund’s完全佐剂(FCA)0.1ml致炎,复制成佐剂性关节炎大鼠(AA)模型。致炎后第12天开始给药,各组药物剂量均相当于临床用量的10倍。各组的给药量如下:NC组、MC组:给予生理盐水灌胃,1ml/100g,每天一次;LEF组:将LEF加生理盐水,配制成混悬液(每ml含LEF 0.3mg),按1ml/100g剂量灌胃,每天一次;XFC组:将XFC去除胶囊壳,加生理盐水,配制成混悬液(每ml含药量0.3g),按1ml/100g的剂量灌胃,每天一次。各组均连续灌胃给药4周。观察各组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数,ELISA法测定大鼠血清IL-10、IL-21表达量,流式细胞仪检测外周血GMP-140、CD40L表达,逆转录聚合酶链式反应检测大鼠滑膜组织ETS-1、PAF mRNA的表达。结果:临床研究结果显示:(1)各组证型的血小板参数异常频数(率)的变化:血小板参数异常数最多的为湿热痹阻证。其中,PLT异常率依次降低为湿热痹阻证、寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证、肝肾不足证;MPV异常率依次降低为肝肾不足证、湿热痹阻证、痰瘀痹阻证、寒湿痹阻证;PCT异常率依次降低为湿热痹阻证、肝肾不足证、痰瘀痹阻证、寒湿痹阻证;PDW异常率依次降低为痰瘀痹阻证、湿热痹阻证、肝肾不足证、寒湿痹阻证。(2)血小板参数比较:湿热痹阻证PLT较其他三个证型均升高(P<0.01或P<0.05),寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证PLT较肝肾不足证升高(P<0.01)。寒湿痹阻证PDW较肝肾不足证升高(P<0.05)。(3)生活质量积分比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证、寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证生理功能积分升高,湿热痹阻证健康自我认识升高(P<0.01或P<0.05)。与湿热痹阻证比较,痰瘀痹阻证生理功能积分降低(P<0.05)。(4)关节、全身症状积分比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证、寒湿痹阻证关节疼痛、关节压痛、食欲减退、食后腹胀积分升高(P<0.05),痰瘀痹阻证晨僵积分升高(P<0.05)。与湿热痹阻证、寒湿痹阻证比较,痰瘀痹阻证关节疼痛积分降低(P<0.05)。(5)HAQ、DAS-28、VAS比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证、寒湿痹阻证HAQ、DAS-28、VAS积分升高(P<0.01或P<0.05),痰瘀痹阻证VAS积分升高(P<0.05)。与湿热痹阻证比较,痰瘀痹阻证HAQ积分升高,DAS-28积分降低(P<0.01或P<0.05)。与寒湿痹阻证比较,痰瘀痹阻证DAS-28积分降低(P<0.05)。(6)实验室指标比较:与肝肾不足证比较,湿热痹阻证RF、CCP、CRP、ESR升高(P<0.01或P<0.05),寒湿痹阻证RF、CRP、ESR升高(P<0.01),痰瘀痹阻证RF、ESR升高(P<0.05)。与湿热痹阻证比较,寒湿痹阻证CCP降低(P<0.05),痰瘀痹阻证RF、CCP、CRP、ESR降低(P<0.01)。与寒湿痹阻证比较,痰瘀痹阻证RF、CRP、ESR降低(P<0.01或P<0.05)。(7)血小板活化物GMP-140、PAF及ETS-1比较:且在组间比较,湿热痹阻证GMP-140、PAF较其他三个证型均升高(P<0.01或P<0.05)。寒湿痹阻证、痰瘀痹阻证PAF较肝肾不足证升高(P<0.01或P<0.05)。痰瘀痹阻证ETS-1较肝肾不足证降低(P<0.05)。(8)RA不同证型血小板活化物与其他指标相关性分析:肝肾不足证GMP-140与健康自我认识、Ig G呈正相关,PAF与关节晨僵呈正相关,ETS-1与CCP-AB呈正相关;GMP-140与PCT呈负相关(P<0.05)。湿热痹阻证GMP-140与关节疼痛、食后腹胀、PLT、CRP呈正相关,ETS-1与大便稀溏、DAS-28、ESR呈负相关,PAF与生理功能、关节疼痛、倦怠乏力呈正相关(P<0.01或P<0.05)。寒湿痹阻证GMP-140与关节肿胀、大便稀溏呈正相关,PAF与食欲减退、MPV呈正相关,ETS-1与关节晨僵呈正相关(P<0.05)。痰瘀痹阻证GMP-140与大便稀溏、PLT呈正相关,PAF与关节晨僵、CCP-AB呈正相关,ETS-1与关节肿胀呈正相关(P<0.05)。动物实验研究显示:(1)关节炎模型的观察及药物干预结果:造模后,佐剂关节炎大鼠出现四肢关节红肿、跖趾溃烂,皮毛干枯、稀疏,蜷缩少动,眯眼、呆滞、精神萎靡,反应迟钝,有不同程度的耸毛,饮食量、饮水量下降,部分大鼠出现大便稀溏。第12d开始给药,第25d治疗组大鼠四肢关节红肿逐渐消退,体质量、饮食饮水量开始增加,精神转好,活跃。第35d各治疗组大鼠毛发较光泽,行为活跃。第40d各治疗组大鼠体质量、饮食饮水量仍有增加,其中XFC组较MTX组显著。而正常对照组大鼠状态无明显变化。(2)新风胶囊对足跖肿胀度、关节炎指数的影响:给药前,与NC组相比,MC组、LEF组、XFC组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数显著升高(P<0.01)。给药后,与MC组相比,LEF组、XFC组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数显著降低(P<0.01或P<0.05)。(3)新风胶囊对血清IL-10、IL-21、ETS-1、PAF影响:与NC组比较,MC组细胞因子IL-21、PAF显著升高,细胞因子IL-10、ETS-1显著降低(P<0.05或P<0.01)。与MC组比较,XFC组细胞因子IL-21、PAF表达量降低,细胞因子IL-10、ETS-1表达升高(P<0.05或P<0.01)。(4)新风胶囊对外周血GMP-140、CD40L的影响:与NC组相比,MC组大鼠外周血GMP-140、CD40L显著升高(P<0.01)。与MC组比较,LEF组、XFC组外周血GMP-140、CD40L显著降低(P<0.01或P<0.05)。(5)新风胶囊对滑膜ETS-1、PAF mRNA的影响:与NC组比较,MC组ETS-1mRNA、蛋白表达降低,血小板活化产物PAFmRNA表达升高。与MC组比较,LEF和XFC组ETS-1mRNA升高,PAFmRNA降低(P<0.01或P<0.05)。(6)血小板活化物与足跖肿胀度、关节炎指数、IL-10、IL-21、ETS-1 mRNA关系:GMP-140与足跖肿胀度呈正相关,CD40L与IL-21呈正相关,PAFmRNA与足跖肿胀度呈正相关(P<0.01或P<0.05)。结论RA血小板活化的中医证候以湿热痹阻为主,其次为寒湿痹阻,伴有痰瘀痹阻,血小板活化参与RA湿热痹阻、寒湿痹阻、痰瘀痹阻过程,提示与“脾虚湿盛”病机密切相关。健脾化湿通络中药新风胶囊通过调控ETS-1、IL10表达,降低血小板活化,抑制免疫炎症反应,减少免疫复合物在滑膜组织沉积,改善RA关节症状。
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