药用植物苦参组织培养的研究

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本试验对苦参组织培养及快速繁殖进行了系统研究:以苦参叶片、茎段、幼胚和胚轴为外植体,研究了外植体、激素种类配比、温度以及光照条件等对苦参诱导愈伤组织的影响,并对苦参芽的继代增殖和不定芽分化进行了研究,完善了苦参快速繁殖技术体系,为苦参工业化生产提供了理论基础。研究结果如下:(1)苦参不同外植体的最佳消毒方法:苦参茎段的最佳消毒方法为75%酒精消毒30-40s后,无菌水冲洗数遍,再用0.1%的氯化汞消毒6min,无菌水冲洗6次以上;叶片的最佳消毒方法为75%酒精消毒30-40s后,无菌水冲洗数遍,再用0.1%的氯化汞消毒4min,无菌水冲洗6次以上;种子的最佳消毒方法为75%酒精消毒30-40s后,无菌水冲洗数遍,再用0.1%的氯化汞消毒8min,无菌水冲洗6次以上。(2)通过苦参不同外植体培养基筛选试验得出茎段诱导愈伤的最适培养基为MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA2.0mg/L,诱导率最高可达到98.9%,并发现以竖立直插方式接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L上的茎段产生的愈伤具有很强的分化能力;苦参叶片诱导愈伤的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D2.0mg/L,出愈率可达到91.1%;苦参幼胚外植体诱导愈伤的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.5mg/L;MS培养基附加6-BA0.1mg/L和2,4-D0.5mg/L为苦参中胚轴诱导愈伤组织的最适培养基。(3)研究发现温度对愈伤组织影响较大,茎段愈伤组织的最适温度为24℃-26℃,出愈率最高可达到96.3%,且愈伤组织不容易褐变;光照对叶片愈伤组织的影响为:在黑暗条件下,愈伤组织表层常为较疏松的白色颗粒状,内部较为坚实;而光照下,愈伤组织偏绿色,且质地较为疏松,容易分块。(4)通过苦参愈伤组织分化不定芽的筛选试验发现仅有当茎段以竖立直插方式接种在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L上,诱导出的茎尖愈伤才具有分化出不定芽的能力,且分化的最适培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L。(5)通过不同外植体的芽的继代增殖筛选试验发现切去根的苦参无菌苗能较快地诱导出大量丛生芽,且接种在MS培养基附加IBA0.5mg/L和6-BA2.0mg/L上时,能以最大的增殖率诱导出丛生芽,且芽质量较好。(6)苦参芽苗接种在IBA浓度为1.5mg/L的1/2MS培养基时,生根能力最强,生根率高达81.3%;将苦参组培苗移栽到基质为30%泥炭土+10%珍珠岩+60%蛭石的营养钵中,移栽成活率可达90%。
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