论文部分内容阅读
研究目的:本研究通过体外实验,检测不同极化表型巨噬细胞对SCC-15细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。采用免疫组化染色方法检测人口腔鳞癌组织芯片中CD68阳性细胞(肿瘤相关巨噬细胞,TAMs)的表达水平,统计分析其与OSCC临床病理特征之间的关系,同时采用免疫荧光双染的方法检测CD206阳性细胞(M2型巨噬细胞)与CD68阳性细胞表达的比例,统计其与淋巴结转移的相关性。初步探讨不同极化表型巨噬细胞对OSCC的生物学特征的影响及可能机制,旨在为OSCC预后判断及生物治疗靶向提供可能方向。研究方法:1.体外序列刺激THP-1诱导分化为M1、M2型巨噬细胞,并通过流式细胞术及Real-time-qPCR检测其表型;2.CCK-8增殖实验检测M1、M2型条件培养基作用于SCC-15细胞24 h、48 h、72 h后,增殖变化;3.Transwell实验检测SCC-15细胞与M1、M2型巨噬细胞非接触共培养后,迁移及侵袭细胞数的变化;4.Real-time-qPCR实验检测SCC-15细胞与M1、M2型巨噬细胞非接触共培养后,增殖相关基因Cyclin D1、Ki-67,及凋亡相关基因Bcl-2的表达情况;5.Western Blotting实验检测SCC-15细胞与M1、M2型巨噬细胞非接触共培养后,凋亡相关蛋白Caspase-9,迁移、侵袭相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9的表达情况;6.免疫组织化学染色方法检测人口腔癌组织芯片中62例OSCC组织及10例口腔正常黏膜组织中CD68(TAMs)表达情况,分析其与OSCC临床病理特征之间的关系;7.免疫组织荧光双染色方法检测M2型巨噬细胞的表达情况,统计其与淋巴结转移情况的相关性。研究结果:1.体外实验证明M1型巨噬细胞促进SCC-15细胞的凋亡,抑制其增殖、迁移及侵袭能力,M2型巨噬细胞则抑制SCC-15细胞的凋亡,促进其增殖、迁移及侵袭能力;2.IHC染色方法结果:与正常黏膜组织相比,肿瘤相关巨噬细胞在口腔鳞状细胞癌中浸润密度高,与肿瘤是否有淋巴结转移有相关性,差异具有统计学意义(P<0.05);3.IF染色法结果:M2型巨噬细胞在TAMs中的比例与淋巴结是否转移有相关性,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:TAMs与OSCC发生、发展及预后密切相关,不同极化表型巨噬细胞对肿瘤生物学行为影响不同。M1型巨噬细胞有抑制OSCC发展作用,M2型巨噬细胞则在促进OSCC发展中发挥较重要作用。