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目的:本课题采用高效液相色谱法观察针刺“脾俞”穴对人参皂苷Rg3在慢性疲劳模型大鼠不同时相脏腑的分布代谢影响,采用光学显微镜观察大鼠血清中T淋巴细胞转化率,流式细胞术检测大鼠脾脏中T细胞亚群CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞比例,CD4+/CD8+的比值,ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4含量变化,RT-PCR法检测脾脏中IFN-γ和IL-4 m RNA表达水平,采用Western Blot法检测脾脏中IFN-γ和IL-4蛋白表达水平,探讨针刺“脾俞”穴联合人参皂苷Rg3,“针药结合”益气健脾抗疲劳的作用机理。材料与方法:论文一:雄性Wistar大鼠116只随机分为4组:空白对照组（33只）,模型组（33只）,空白加针刺组（25只）,模型加针刺组（25只）。采用强制冷水游泳结合慢性束缚法进行模型复制。造模时间21d。21d后,模型组和空白对照组大鼠各随机抽取8只大鼠,通过检测其在造模前后的体重和血清乳酸含量的改变情况来判定造模是否成功。空白加针刺组和模型加针刺组于模型复制成功后,给予针刺“脾俞”穴治疗,进针后针柄接电针治疗仪,电压4.5 V,频率为4/20 Hz频率的疏密波,强度以大鼠局部皮肤肌肉微颤为度,留针20 min,1次/d,第7天针刺结束后,各组大鼠立即尾静脉注射人参皂苷Rg3。各组大鼠分别取5只,于给药后5、30、60、120 min经大鼠眼眶取血2ml于肝素化离心管中,3000 rpm离心10 min,分离血浆,高效液相色谱法检测各时间段各组大鼠血浆中人参皂苷Rg3的含量。各组剩余的20只大鼠分别于0.5、1、2、4 h各处死5只,采集心、肝、脾、肺和肾组织,取组织样品0.5 g,加入甲醇1 ml,组织匀浆,震荡10 min,超声10 min,4000rpm离心10 min,收集上清液,高效液相色谱法检测各时间段各组大鼠心、肝、脾、肺和肾中人参皂苷Rg3的含量。论文二:雄性Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组,模型组,人参皂苷组,针刺组,人参皂苷联合针刺组,每组8只。采用强制冷水游泳结合慢性束缚法进行模型复制。模型复制成功后,针刺组给予针刺“脾俞”穴治疗,人参皂苷组给予大鼠尾静脉注射人参皂苷Rg3,人参皂苷联合针刺组,先给大鼠尾静脉注射人参皂苷Rg3,再给予针刺“脾俞”穴,1次/d,连续治疗7天。末次给药及针刺后1h,各组大鼠断尾取血,制作血涂片,采用光学显微镜观察大鼠血清中T淋巴细胞转化率;腹主动脉取血后剪开腹腔摘取脾脏,制作脾细胞悬液,用流式细胞仪检测大鼠脾脏中T细胞亚群CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例,及CD4+T/CD8+T的比值。论文三:雄性Wistar大鼠40只随机分为空白对照组,模型组,人参皂苷组,针刺组,人参皂苷联合针刺组,每组8只。各组大鼠模型复制及干预结束后,用10%水合氯醛以3ml/kg体质量腹腔注射麻醉,腹主动脉穿刺采集全血,取上清液冻存于-80℃冰箱中,Elisa法检测血清中IFN-γ和IL-4含量。同时采集大鼠脾脏组织,采用RT-PCR法检测脾脏中IFN-γ和IL-4 m RNA表达水平,Western Blot法检测脾脏中IFN-γ和IL-4蛋白表达水平。结果:论文一:1模型评价:造模前两组大鼠体重差异无统计学意义（p>0.05）,造模后与空白对照组比较,模型组体重显著减少（p<0.01）,乳酸含量显著升高（p<0.01）,说明模型复制成功。2各组大鼠血浆中人参皂苷Rg3含量:与空白对照组同期比较,模型组60min及120min血浆中人参皂苷Rg3的含量显著降低,空白针刺组60min及120min血浆中人参皂苷Rg3的含量显著增加（P<0.05）;与模型组比较,模型针刺组及空白针刺组60min及120min血浆中人参皂苷Rg3的含量显著增加（P<0.05）。在5 min时血浆中人参皂苷Rg3的含量最高,之后逐渐降低。3各组大鼠肝脏中人参皂苷Rg3分布:与空白对照组同期比较,模型组1 h、2 h及4 h人参皂苷Rg3的含量显著降低（P<0.05）,空白针刺组1 h、2 h及4 h人参皂苷Rg3的含量显著增加（P<0.05）,模型针刺组无明显变化;与模型组比较,模型针刺组及空白针刺组1 h、2 h及4 h人参皂苷Rg3的含量均显著增加（P<0.05）。1 h时肝脏中人参皂苷Rg3的含量达到峰值,之后逐渐降低。4各组大鼠心脏中人参皂苷Rg3分布:与空白对照组同期比较,模型组0.5 h及1 h人参皂苷Rg3的含量显著降低（P<0.05）,空白针刺组0.5 h及1 h人参皂苷Rg3的含量显著增加（P<0.05）;与模型组比较,模型针刺组及空白针刺组0.5 h及1 h人参皂苷Rg3的含量均显著增加（P<0.05）。心脏中0.5 h时人参皂苷Rg3的含量最高,之后逐渐降低,四组大鼠心脏组织中4 h时均检测不到人参皂苷Rg3。5各组大鼠脾脏中人参皂苷Rg3分布:与空白对照组比较,模型组0.5h、1 h、及2h人参皂苷Rg3的含量显著降低（P<0.05）,空白针刺组0.5 h、1 h、及2 h人参皂苷Rg3的含量显著增加（P<0.05）;与模型组比较,模型针刺组及空白针刺组0.5h、1 h、及2 h人参皂苷Rg3的含量均显著增加（P<0.05）。脾脏中0.5 h时人参皂苷Rg3的含量最高,之后逐渐降低。6各组大鼠肺脏中人参皂苷Rg3分布:与空白对照组同期比较,模型组各时间点人参皂苷Rg3的含量均降低,空白针刺组各时间点人参皂苷Rg3的含量均升高,但均不具有统计学意义（P>0.05）;与模型组比较,空白针刺组1 h、2 h人参皂苷Rg3的含量显著增加（P<0.05）,模型针刺组各时间点人参皂苷Rg3的含量均有增加,但不具有统计学意义（P>0.05）,四组大鼠肺脏组织中4 h时均检测不到人参皂苷Rg3。7各组大鼠肾脏中人参皂苷Rg3分布:与空白对照组同期比较,模型组2 h及4 h人参皂苷Rg3的含量显著降低（P<0.05）,空白针刺组2 h及4 h人参皂苷Rg3的含量显著增加（P<0.05）;与模型组比较,模型针刺组及空白针刺组2 h及4 h人参皂苷Rg3的含量均显著增加（P<0.05）。肾脏中1 h时人参皂苷Rg3的含量达到峰值,之后逐渐降低。论文二:1各组大鼠淋巴细胞转化率结果:与空白对照组比较,各组大鼠淋巴细胞转化率显著降低（P<0.01）;与模型组比较,人参皂苷组,针刺组及人参皂苷联合针刺组淋巴细胞转化率显著升高（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,人参皂苷组和针刺组淋巴细胞转化率显著降低（P<0.05）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。未转化的淋巴细胞呈正圆形,细胞核呈紫色,正圆形;胞浆呈淡蓝色极少,呈新月形位于细胞边缘。发生转化的淋巴母细胞个体增大,细胞核变大,偶见核仁出现,形态不规则,胞浆明显增多,胞浆内偶见空泡出现。2流式细胞结果:CD3+T细胞比例结果:与空白对照组比较,模型组CD3+T细胞比例显著降低（P<0.01）,人参皂苷组CD3+T细胞比例显著降低（P<0.05）;与模型组比较,针刺组CD3+T细胞比例显著升高（P<0.01）,人参皂苷联合针刺组CD3+T细胞比例显著升高（P<0.05）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。CD4+T细胞比例结果:与空白对照组比较,模型组CD4+T细胞比例升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,人参皂苷联合针刺组CD4+T细胞比例降低,差异有统计学意义（P<0.05）。CD8+T细胞比例结果:与空白对照组比较,各组大鼠CD8+T细胞比例显著降低（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、人参皂苷组、人参皂苷联合针刺组CD8+T细胞比例均显著升高（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,人参皂苷组CD8+T细胞比例显著降低（P<0.01）。CD4+T/CD8+T结果:与空白对照组比较,模型组、皂苷组CD4+T/CD8+T比值均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、人参皂苷组及人参皂苷联合针刺组CD4+T/CD8+T比值显著降低（P<0.01）。与人参皂苷联合针刺组比较,人参皂苷组CD4+T/CD8+T比值显著升高,（P<0.05）。论文三:1各组大鼠血清中IFN-γ和IL-4含量结果:与空白对照组比较,各组大鼠血清中IFN-γ含量显著降低（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、皂苷组、人参皂苷联合针刺组IFN-γ含量显著升高（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,针刺组、人参皂苷组IFN-γ含量显著降低（P<0.01）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较,各组大鼠血清中IL-4显著升高（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、皂苷组、人参皂苷联合针刺组IL-4含量显著降低（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,针刺组、人参皂苷组IL-4含量显著升高（P<0.01）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。2各组大鼠脾脏中IFN-γ和IL-4的蛋白表达水平结果:与空白对照组比较,各组大鼠IFN-γ蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、皂苷组、人参皂苷联合针刺组IFN-γ蛋白表达水平显著升高（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,针刺组和人参皂苷组IFN-γ蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较,各组大鼠IL-4蛋白表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、皂苷组、人参皂苷联合针刺组IL-4蛋白表达显著水平降低（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,针刺组和人参皂苷组IL-4蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。3各组大鼠脾脏中IFN-γ和IL-4 m RNA表达水平结果:与空白对照组比较,各组大鼠IFN-γm RNA表达水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、皂苷组、人参皂苷联合针刺组IFN-γm RNA表达水平显著升高（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,针刺组和人参皂苷组IFN-γm RNA表达水平显著降低（P<0.05）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较,各组大鼠IL-4 m RNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,针刺组、皂苷组、人参皂苷联合针刺组IL-4 m RNA表达水平显著降低（P<0.01）;与人参皂苷联合针刺组比较,针刺组和人参皂苷组IL-4 m RNA表达水平显著升高（P<0.05）;而人参皂苷组与针刺组之间比较无统计学意义（P>0.05）。结论:1.针刺“脾俞”穴可以增加人参皂苷Rg3在血内的含量和在五脏中的分布,延长药物在体内的停留时间,这可能是针药并用协同增效的物质基础。2.针刺“脾俞”穴和静脉注射人参皂苷Rg3是通过纠正慢性疲劳模型大鼠Th1/Th2失衡状态,调节T淋巴细胞亚群,增强机体细胞免疫功能实现其抗疲劳作用。3.针刺“脾俞”穴和静脉注射人参皂苷Rg3均具有抗疲劳作用,并且二者联用具有协同增效作用,为针药并用协同增效抗疲劳提供实验理论基础。