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目的：研究细胞周期蛋白依赖激酶抑制齐(?)(CDKIs)p16基因在SLE活动期和非活动期患者外周血中CD4+及CD8+T细胞中mRNA及蛋白的表达、CD4+及CD8+T细胞凋亡率及其相关性；并且体外转染高甲基化p16启动子区进入CD4+T细胞中,研究p16基因启动子区活性,从而探讨p16基因甲基化异常及其表达在淋巴细胞凋亡中的机制。方法：收集40例确诊的SLE患者和30例健康对照,应用免疫磁珠法分选CD4+和CD8+T细胞并计数,(1)提取RNA,应用实时定量荧光PCR方法检测外周血CD4+和CD8+T细胞中p16基因mRNA表达水平；(2)应用流式细胞仪检测p16蛋白的胞内表达和细胞凋亡率；(3)转染体外高甲基化后的p16启动子区进入正常的CD4+T细胞,检测启动子区活性。结果：1.细胞计数：SLE患者外周血中CD4+T细胞计数：活动期(6.58±2.59)比健康对照组(15.80±6.81)及非活动期(13.23±2.68)减少,有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较无统计学差异。SLE患者外周血中CD8+T细胞计数：活动期(7.43±1.91)比健康对照组(14.70±4.75)及非活动期(12.32±5.50)减少,有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较无统计学差异。2.p16基因mRNA的表达：在CD4+T细胞中活动期SLE患者(93.264±42.898)比健康对照组(2.245±0.586)及非活动期(1.361±0.154)增加,有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较无统计学差异。在CD8+T细胞中活动期SLE(92.926±38.102)比健康对照组(4.323±0.735)及非活动期(3.722±1.701)增加,有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较无统计学差异。在CD4+T细胞中p16mRNA的表达与SLEDAI评分呈正相关(r=0.730,p<0.01),并且与光敏、关节炎、肾损、补体的降低和抗核抗体有关；在CD8+T细胞中p16mRNA的表达与SLEDAI评分呈正相关(r=0.702,p<0.01),并且与关节炎、肾损、抗核抗体有关。3.p16蛋白的表达：在CD4+T细胞中活动期SLE(3.044±1.062)比健康对照组(0.451±0.106)及非活动期(0.567±0.131)增加,有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较无统计学差异。在CD8+T细胞中活动期SLE(1.927±0.882)比健康对照组(0.500±0.109)及非活动期(0.634±0.144)增加,有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较无统计学差异。4.细胞凋亡率：活动期SLE患者CD4+T细胞的凋亡率(5.415±1.623)比健康对照组(1.356±1.122)及非活动期(0.910±0.219)增加,具有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较,无统计学差异。活动期SLE患者CD8+T细胞的凋亡率(6.079±2.666)比健康对照组(1.524±0.486)及非活动期(1.904±0.772)增加,有统计学差异；而非活动期和健康对照组比较,无统计学差异。5.细胞凋亡与SLEDAI评分和p16表达相关性分析：CD4+细胞的凋亡率与SLEDAI评分呈正相关(r=0.631,p<0.05),与p16的表达呈正相关(r=0.958,p<0.01)；CD8+细胞的凋亡率与SLEDAI呈正相关(r=0.653,p<0.05),与p16的表达呈正相关(r=0.547,p<0.05)。6.体外转染p16基因启动子区活性检测：转染p16启动子区进入CD4+T细胞,荧光素酶活性(255+8.089)比转染空载体组(117+6.333)增加,有统计学差异(t=13.432,p<0.05)；转染高甲基化p16启动子区(137+6.433)比转染未甲基化p16启动子区组(255+8.089)活性下降,有统计学差异(t=11.485,p<0.05)。结论：SLE患者CD4+及CD8+细胞减少,p16基因mRNA表达及蛋白水平在CD4+、CD8+T细胞中增高,CD4+、CD8+T细胞凋亡率增高；CD4+、CD8+T细胞凋亡率与SLEDAI评分和p16的表达有相关性；体外研究显示,高甲基化的p16启动子区转染至正常CD4+的细胞后,活性降低。我们前期研究显示p16基因在SLE患者CD4+和CD8+中存在高甲基化现象,可能抑制p16基因抑制下游序列的转录,而本研究表明p16基因的表达增高,这种不一致性可能与SLE中遗传和表观修饰的不稳定有关。p16表达的增加抑制CD4+和CD8+T细胞增殖,促进CD4+和CD8+T细胞凋亡,导致CD4+和CD8+T细胞数量减少,自身抗原暴露增加,体内免疫失调,SLE发生。