松塔多糖的分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性研究

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红松是松科松属植物,在我国东北部分布广泛。松的药用历史悠久,《本草纲目》等书均有记载。松塔是松科松属植物的球果,具有祛痰、祛风、润肠、止咳平喘和抗菌消炎等功效,具有很高的利用价值。据研究表明,松塔的水提物具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多种功效,但是在现代加工过程中,松塔往往作为加工副产品而废弃不用,造成资源浪费。本文从红松松塔中提取多糖,经过纯化后得到单一的多糖组分,对该单一组分进行结构鉴定。对不同的松塔多糖进行抗氧化活性研究。为系统研究松塔多糖的化学结构和生物活性奠定了坚实的理论基础,为松塔多糖的应用提供了理论依据。本文主要研究成果如下:从红松、华山松和樟子松三种松树的松塔中提取多糖成分。经过三氯乙酸脱蛋白,活性炭脱色得到较纯的多糖。利用仪器和化学方法测定三种松塔多糖的各种理化指标,包括多糖含量、糖醛酸含量、单糖组成、多酚含量、氨基酸组成、分子量以及红外吸收光谱。测定结果表明,三种松塔多糖均是混合物,其中糖醛酸含量约占50%,中性糖含量约占40%,氨基酸和多酚成分不足2%。单糖组成分析结果表明华山松和樟子松松塔粗多糖的单糖组成较为接近,且与红松松塔粗多糖的单糖组成有明显的区别。通过水提醇沉的方式从红松松塔多糖中提取松塔粗多糖,经过三氯乙酸脱蛋白,活性炭脱色,将得到的多糖用乙醇进行分级。得到30%乙醇沉淀的多糖组分PKP-A。该组分多糖经过DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-200凝胶柱分离得到多糖组分PKP-A-3b,回收率为33%。通过高效液相色谱鉴定其为单一组分,分子量为286.59kDa。采用各种化学和仪器方法对PKP-A-3b进行结构鉴定。得到的结论如下:UV吸收和红外光谱测定知其不具有结合的核糖和蛋白,含有糖醛酸;单糖组成分析表明,PKP-A-3b由D-核糖,L-鼠李糖,L-阿拉伯糖,D-木糖,D-甘露糖,D-葡萄糖和D-半乳糖七种单糖组成,摩尔比为0.21:0.29:0.50:0.25:0.38:0.78:1.25;高碘酸氧化实验结果表明,红松松塔多糖PKP-A-3b中主要存在1→2或1→2,6或1→4或1→4,6位连接的糖苷键;Smith降解和气相色谱分析结果表明,七种单糖在多糖中的连接方式均有不被高碘酸钠氧化的键型;1H NMR和13C NMR谱图表明,该多糖组分的单糖残基中包含-和β-两种糖苷键类型。且主要含有三种异头碳,这三种异头碳的类型可能归属于→4)--D-GalpA-(1→、T--D-Galp-(1→和→2)--L-Rhap-(1→。在175.57和171.25处的共振吸收峰说明多糖中含有糖醛酸和脂类结构。对红松、樟子松和华山松三种松塔粗多糖的抗氧化能力进行测定。得到的结论如下:红松、华山松和樟子松三种松塔多糖均具有很强的ABTS+自由基清除能力和羟基自由基清除能力。其中红松松塔多糖的自由基清除能力最强,华山松松塔多糖次之,樟子松松塔多糖最弱。但是三种松塔多糖的自由基清除率均小于VC。当红松松塔多糖的浓度达到30mg/mL的时候,自由基清除率均高于50%。说明红松松塔多糖具有很强的自由基清除能力,具有开发成天然抗氧化剂的潜力,可对其进行进一步的研究。三种松塔多糖的不同自由基清除能力可能与其不同的糖醛酸含量和单糖组成有关。三种松塔多糖对超氧阴离子自由基均没有明显清除作用。用不同浓度的乙醇从红松松塔多糖中沉淀出来的五种多糖组分,对这五种组分的抗氧化活性进行测定。试验结果表明,五种多糖组分对ABTS+自由基和羟基自由基均具有很好的清除能力,且自由基清除率均随着多糖浓度的升高而升高。在ABTS+自由基清除试验中,五种多糖组分的清除能力排序是PKP-E>PKP-A>PKP-D>PKP-B>PKP-C。这五种多糖组分的清除能力均小于红松松塔粗多糖。在羟基自由基清除试验中,五种多糖组分的清除能力排序是PKP-E>PKP-A>PKP-B>PKP-D>PKP-C。其中PKP-E的清除能力要略高于红松松塔粗多糖PKP。PKP-A和PKP-B的清除能力与PKP相差不多。PKP-D和PKP-E的清除能力要小于PKP。所以PKP-A具有开发成天然抗氧化剂的潜力,可对其进行进一步研究。
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