【摘 要】
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本研究利用基因重组技术构建了BPTI真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti电转化毕赤酵母X-33后,筛选出稳定高效的分泌表达rBPTI的工程菌株。经SDS-PAGE、蛋白酶抑制实验、离子交换层
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本研究利用基因重组技术构建了BPTI真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti电转化毕赤酵母X-33后,筛选出稳定高效的分泌表达rBPTI的工程菌株。经SDS-PAGE、蛋白酶抑制实验、离子交换层析纯化及N-端氨基酸测序分析证明,白蛋白信号肽在毕赤酵母中成功地诱导分泌了具有正确N-端序列的rBPTI,与天然BPTI比较具有相同的理化性质和生物学活性。同时在80L发酵条件下,进行了rBPTI表达条件的优化,并建立一种适合于大规模纯化rBPTI的新方法。利用四氯化碳(CCl4)建立Wistar大鼠慢性肝损伤实验模型,证实rBPTI对实验性大鼠慢性肝损伤的保护作用。利用3.5 %的牛磺胆酸钠建立Wistar大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)模型,证实rBPTI对大鼠急性坏死性胰腺炎的治疗作用。说明在保护肝损伤和治疗急性胰腺炎方面,rBPTI具有和天然BPTI相同的药效学作用。本实验的创新之处在于:1)首次利用白蛋白信号肽在毕赤酵母中高效表达了rBPTI;2)建立了大规模发酵和纯化rBPTI的新方法;3)对比观察了rBPTI与BPTI对实验慢性肝损伤和实验急性坏死性胰腺炎的保护和治疗作用。
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