青春双歧杆菌BA005抗逆性研究及其功能性应用

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本研究目的是从婴儿粪便中分离出青春双歧杆菌,经过生化及分子鉴定后,对此分离菌株进行抗逆环境驯化及筛选,对筛选出的优良菌株进行培养条件的优化,从而满足工业化生产的技术需求。为了确保其安全性,对该菌株进行毒理试验,同时进行功能性测试,并开发益生菌相关应用产品。分离得到的疑似目的菌株,通过特征酶及发酵糖试验进行菌种属的筛选,再进一步应用分子生物学方法,提取菌株16S rDNA,通过基因序列的比对,对菌株进行种的鉴定。成功分离出目的菌株——青春双歧杆菌,通过发育树系统命名为:Bifidobacterium adolescentis BA005。通过无氧-有氧交替驯化的方法,筛选出耐氧能力较强的青春双歧杆菌菌株,驯化后菌株的菌落形态和显微镜观察状态基本没有改变,菌体生长速度较无氧培养时缓慢,生长曲线中对数生长期拖后,但对培养后的活菌数影响不大,有氧培养24h后活菌数可达到3.30×1010 cfu/mL。为降低工业生产中的生产成本,本研究采用玉米汁为培养基质,对耐氧Bifidobacterium adolescentis BA005进行培养条件响应面法优化。确定培养的最佳条件:接种量5%,玉米糖化液浓度12.1Bx,初始pH值6.48,培养温度37℃,发酵时间20h。在此条件下菌液最大OD值为1.819,活菌数为3.05×1012 cfu/mL。人工模拟人胃、肠道酸性及酶环境,对耐氧Bifidobacterium adolescentis BA005进行抗胃肠道逆环境菌株筛选,并对常用抗生素耐性进行测试。结果表明,在模拟胃液环境中菌存活率为72.12%;在模拟肠道环境中菌存活率为53.33%;对大多数常用抗生素仅为中度敏感,对氨苄西林具有较强的耐药性。证明此菌株可以发挥其保健作用,维持人体健康。对Bifidobacterium adolescentis BA005进行小鼠急性毒理试验及短期(30天)喂养试验,试验剂量超过了人可能食用剂量的10倍,试验小鼠没有出现中毒或死亡等异常状况,解剖其内脏主要器官,亦未见异常。从而证明此菌为安全菌株,可以放心食用并进行开发利用。通过药物建造腹泻和便秘小鼠模型,对模型小鼠给予不同种类的益生菌剂,通过比较,Bifidobacterium adolescentis BA005菌株对腹泻和便秘症状的缓解和治疗功效最强。基于青春双歧杆菌的诸多功能性,对其进行新产品开发。产品之一为格瓦斯发酵饮料,通过双歧杆菌和酵母菌的共同发酵,饮料中含有丰富的营养物质,酸甜适口;产品之二为功能性发酵饲料,通过双歧杆菌和酵母菌共同对常规饲料进行发酵,产生更利于动物吸收利用的营养物质。喂养奶牛可以提高其对常规饲料的消化吸收率,平衡胃肠道微生态系统,增强免疫力。
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