拟南芥一具亮氨酸拉链的转录因子的功能研究与表达分析

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转录因子(Transcription factor,TF)又称反式作用因子,是一群能与真核基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异性结合,从而保证目的基因以特定的强度、在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。当植物感受外界干旱、高盐、激素、病害时,通过一系列信号传递,激发转录因子,转录因子与相应的顺式作用元件结合后,激活RNA聚合酶Ⅱ转录复合物,从而启动特定基因的转录表达,最后通过基因产物的作用对内、外界信号做出的调节反应Ⅲ。植物许多基因的表达都是由特定的转录因子与特定的顺式作用元件相互作用调控的。 转录因子根据表达的特点可以分为两种,一种是组成型转录因子,无论在逆境还是正常状况下基因都表达。组成型转录因子的基因表达不受外界影响,但在无逆境时蛋白成惰性状态或活性很低,逆境状态下其空间结构发生改变或将其磷酸化,激发其下游靶基因启动子核心序列的结合活性,下游基因才能表达。另一种是诱导型转录因子,只有在逆境下基因才会表达,绝大部分的转录因子都是这种自身的反馈调节。诱导型转录因子是逆境诱导其表达,然后进一步启动其下游功能基因的表达。但是,细胞如何感知外界逆境信号,如何进一步将逆境信号传导给转录因子,转录因子如何调控其下游靶基因,目前仍然缺乏足够的信息和证据来描述一个相对完整和清晰的植物转录因子应答胁迫的信号系统。 bZIP家族的转录因子是与植物逆境抗性相关的转录因子家族。植物碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白是一类重要的植物转录因子,bZIP类转录因子识别核心序列ACGT的顺式作用元件为CACGTG(G 盒)、CACGTC(C 盒)、TACGTA(A 盒)等,一些受ABA诱导的基因的启动子区都含有这些元件[3]。其中G盒元件普遍存在于受ABA,生长素,茉莉酸,水杨酸诱导的基因中,例如在拟南芥bZIP家族中,G盒结合因子(GBF1、GBF2和GBF3)有相似的ABA丰富区,使它们有相似的功能,而且三个bZIP蛋白之间还能形成异二聚体,异二聚体的多样性为GBF蛋白功能多样性提供了基础[4]。 酵母中发现了bZIP家族的转录因子与酵母的抗氧化性相关,植物中的转录因子at3g51960与酵母中的这一转录因子在空间结构上有很高的同源性,为了验证它在体内的功能,本实验构建了过量表达载体和沉默载体,利用花浸染法把农杆菌携带的双元表达载体,pCAMBTA3301:at3g51960,pCAMBTA3301:at3g51960Promoter和IpCAMBTA3301:at3g51960-GFP及pCAMBTA3301:at3g51960 eDNA转入拟南芥,通过多次筛选已经获得了转基因拟南芥的纯合植株,对获得的转基因植株的表型分析发现,在过量表达at3g51960的转基因拟南芥中对胁迫的抗性有一定程度的变化,因此推测at3g51960可能参与植物的抗性调节。
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