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目的:
本文旨在研究miR-218-5p在高危型HPV感染致癌进展中的作用,以HPV相关宫颈癌为研究对象,为宫颈癌以及HPV相关肿瘤的临床诊断、预后和治疗提供参考。
方法:
1.使用R语言分析GSE9750数据库,找出宫颈癌和正常宫颈细胞两者中差异表达基因。
2.进一步分析差异表达基因,用GSEAv3.0软件KEGG基因集进行基因通路富集分析。
3.GSEA软件分析宫颈癌中NF-κB通路激活时,基因表达情况。
4.在靶向LYN的miRNA数据库和宫颈癌相关miRNA数据库这两个数据库中寻找重叠miRNA。
5.通过免疫组化技术检测宫颈癌及其对应癌旁正常组织中LYN的表达情况。
6.通过westernblot和实时定量荧光PCR技术检测宫颈癌及其对应癌旁正常组织中LYN的表达情况。
7.通过实时定量荧光PCR技术检测宫颈癌及其对应癌旁正常组织中miR-218-5p和miR-143-3p的表达情况。
8.通过westernblot和实时定量荧光PCR技术检测HeLa和SiHa两种HPV相关宫颈癌细胞系中LYN的表达情况。
9.通过实时定量荧光PCR技术检测HeLa和SiHa两种HPV相关宫颈癌细胞系中miR-218-5p和miR-143-3p的表达情况。
10.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,实时定量荧光PCR技术检测细胞中miR-218-5p的表达情况。
11.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,细胞增殖实验观察HeLa细胞克隆株形成情况。
12.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,细胞划痕试验检测HeLa细胞的迁移能力。
13.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,transwell试验检测HeLa细胞的侵袭能力。
14.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,AnnexinV-FITC细胞凋亡试验检测细胞凋亡情况。
结果:
1.发现宫颈癌和正常宫颈细胞中1839个差异表达基因;
2.在宫颈癌中,NF-κB通路激活;
3.在宫颈癌中,LYN表达增高、miR-218-5p表达降低;
4.miR-218-5p抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导宫颈癌细胞的死亡;
结论:miR-218-5p抑制HPV所致宫颈癌的恶性进展。
本文旨在研究miR-218-5p在高危型HPV感染致癌进展中的作用,以HPV相关宫颈癌为研究对象,为宫颈癌以及HPV相关肿瘤的临床诊断、预后和治疗提供参考。
方法:
1.使用R语言分析GSE9750数据库,找出宫颈癌和正常宫颈细胞两者中差异表达基因。
2.进一步分析差异表达基因,用GSEAv3.0软件KEGG基因集进行基因通路富集分析。
3.GSEA软件分析宫颈癌中NF-κB通路激活时,基因表达情况。
4.在靶向LYN的miRNA数据库和宫颈癌相关miRNA数据库这两个数据库中寻找重叠miRNA。
5.通过免疫组化技术检测宫颈癌及其对应癌旁正常组织中LYN的表达情况。
6.通过westernblot和实时定量荧光PCR技术检测宫颈癌及其对应癌旁正常组织中LYN的表达情况。
7.通过实时定量荧光PCR技术检测宫颈癌及其对应癌旁正常组织中miR-218-5p和miR-143-3p的表达情况。
8.通过westernblot和实时定量荧光PCR技术检测HeLa和SiHa两种HPV相关宫颈癌细胞系中LYN的表达情况。
9.通过实时定量荧光PCR技术检测HeLa和SiHa两种HPV相关宫颈癌细胞系中miR-218-5p和miR-143-3p的表达情况。
10.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,实时定量荧光PCR技术检测细胞中miR-218-5p的表达情况。
11.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,细胞增殖实验观察HeLa细胞克隆株形成情况。
12.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,细胞划痕试验检测HeLa细胞的迁移能力。
13.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,transwell试验检测HeLa细胞的侵袭能力。
14.HeLa细胞转染miR-218-5p模拟物、抑制剂或相应对照后,AnnexinV-FITC细胞凋亡试验检测细胞凋亡情况。
结果:
1.发现宫颈癌和正常宫颈细胞中1839个差异表达基因;
2.在宫颈癌中,NF-κB通路激活;
3.在宫颈癌中,LYN表达增高、miR-218-5p表达降低;
4.miR-218-5p抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导宫颈癌细胞的死亡;
结论:miR-218-5p抑制HPV所致宫颈癌的恶性进展。