肌内脂肪是猪的重要经济性状,脂肪酸组成是影响猪肉口味的重要因素。脂滴对于肌内脂肪以及脂肪酸的调节至关重要。脂滴是脂质和能量稳态中心的储存细胞器,脂滴具有独特的结构,脂滴是由甘油三酯、单层的磷脂以及磷脂表面的许多参与细胞生物学过程的蛋白质所组成。丝状的肌动蛋白、管状的微管以及结构功能较为稳定的中间丝共同组成丰富多彩的细胞骨架网络。细胞骨架是一种丝状支架,从细胞质膜到细胞核都存在其分布,细胞骨架三种组分的相互作用有助于维持细胞的内部结构稳定。脂滴的运动主要取决于细胞骨架,研究脂滴代谢和运动对解析肌内脂肪代谢机理有着至关重要的作用,然而目前脂滴与细胞骨架互作以及脂滴运动的分子机制尚不清楚。本研究发现微丝相关蛋白2和3（ARP2 and ARP3）调控脂滴与细胞骨架结合,进一步通过亚细胞荧光标记、激光共聚焦荧光显微镜观测、蛋白结构域分析、免疫共沉淀串联蛋白质免疫印迹、脂质合成信号通路磷酸化水平检测、反转录PCR定量检测、活细胞工作站观测等方法揭示了微丝相关蛋白2和3调节脂滴与细胞骨架结合,从而促进细胞骨架动力蛋白MYH9在脂滴表面的募集进而调节脂滴运动以及脂滴代谢。本研究从细胞器相互作用的角度出发,解析了脂滴运动的分子机制,为后续猪的肌内脂肪研究提供了新思路。主要研究结果如下:（1）ARP3-MYH9蛋白复合物调节脂滴的运动。构建ARP3-EGFP荧光载体,免疫荧光技术检测ARP3、微丝以及脂滴三者亚细胞定位;免疫荧光以及CO-IP检测ARP3、MYH9互作情况。敲低MYH9,脂滴运动显著减缓。（2）ARP3调节脂滴与微丝的接触。干涉ARP3后提取细胞内脂滴,体外37℃孵育胞内脂滴与微丝,与对照组相比,Si ARP3脂滴与微丝的结合比例降低。ARP3调节脂滴与微丝接触的关键结构域为第1-112个氨基酸区域。（3）微丝蛋白ARP2和ARP3与马达蛋白MYH9共定位于脂滴表面,ARP3促进MYH9在脂滴表面的募集。WB检测细胞分离脂滴组分,干涉ARP3组脂滴组分MYH9蛋白表达量显著下调。（4）MYH9调节脂滴与线粒体的接触。干涉马达蛋白MYH9促进细胞内脂滴含量增多;甘油三酯含量增多;脂滴与线粒体的接触减少。（5）ARP2和ARP3调节脂滴代谢相关基因以及脂质合成酶的表达。干涉ARP2和ARP3后ASK1、JNK、P38、AKT蛋白的磷酸化水平显著上升,ARP2、ARP3通过调节脂质合成代谢通路进而调节通路下游脂质合成酶的表达来调节细胞内的脂质水平。以上结果表明:ARP3是脂滴与微丝结合的关键蛋白,ARP3可以促进马达蛋白MYH9到脂滴表面的募集。MYH9是脂滴沿微丝运动的重要马达蛋白,敲低MYH9细胞内脂滴运动减少进而使得脂滴与线粒体的接触减少,细胞内脂滴含量增多。ARP2和ARP3通过调节细胞内脂质含量进而来调节细胞的生命活动。本研究初步阐明了ARP2/ARP3调节细胞内脂滴代谢以及脂滴运动的分子机制,为脂滴动力学的研究提供了新思路。